芽胞桿菌BvR001對大麗輪枝菌抑制效果研究.pdf

收稿日期 修訂日期 基金項目 國家重點研發(fā)計劃 國家自然科學(xué)基金 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科 研業(yè)務(wù)費專項 通信作者 芽胞桿菌 對大麗輪枝菌抑制效果研究 紀(jì)曉彬 王 丹 劉 政 李 冉 宋 健 張丹丹 陳捷胤 戴小楓 林克劍 石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院 新疆綠洲農(nóng)業(yè)病蟲害治理與植保資源利用重點實驗室 石河子 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所 北京 新疆農(nóng)墾科學(xué)院植物保護研究所 石河子 摘要 為研發(fā)綠色 安全 高效的作物黃萎病生物防治產(chǎn)品 本研究以生防菌株 為研究對象 通過對黃萎病 菌的抑菌效果測定 可濕性粉劑研制 在寄主根際的定殖能力與防效測定 明確該菌株對黃萎病具有防控效果 序列檢測和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建分析表明 該菌株屬于芽胞桿菌屬 并且與貝萊斯芽胞桿菌 進 化關(guān)系最近 推測其可能是貝萊斯芽胞桿菌 平板對峙試驗表明 該菌對 種基因型 落葉型和非落葉型 大麗輪枝 菌 和 菌落擴展的抑制率分別為 和 研發(fā)了該菌的可濕性粉劑配方 吸附量 為 的發(fā)酵液 硅藻土母粉 十二烷基磺酸鈉 木質(zhì)素磺酸鈉 羧甲基纖維素鈉 維生素 該配方得到的制劑活芽胞量為 潤濕時間 懸浮率為 雜菌率為 細度通過率 干燥減量 利用煙草和棉花測試發(fā)現(xiàn) 該菌劑對寄主植物安全無毒 且 能有效定殖于寄主根際 顯著降低了黃萎病菌繁殖擴展 對黃萎病具有良好的防效 關(guān)鍵詞 芽胞桿菌 可濕性粉劑 黃萎病 生物防治 中圖分類號 文獻標(biāo)識碼 卷第 期 紀(jì)曉彬等 芽胞桿菌 對大麗輪枝菌抑制效果研究 黃 萎 病 是 由 大 麗 輪 枝 菌 引起的典型土傳維管束真菌病害 嚴(yán)重威脅 農(nóng)作物生產(chǎn)安全 大麗輪枝菌寄主范圍十分廣泛 在我國自然病圃和人工病圃中大麗輪枝菌可感染 科 多 種 植 物 除 棉 花 外 茄 科 豆 科 葫 蘆 科 菊科 唇 形 科 和 莧 科 等 科 的 多 種 植 物 亦 可 受 害 每年給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大損失 黃萎病對 棉花生產(chǎn)造成的危害尤為嚴(yán)重 是棉花生產(chǎn)上的頭 號病害 受害棉株葉片變黃枯萎 蕾鈴脫落 棉鈴 變少 一般減產(chǎn) 左右 重者達 以上 化 學(xué)農(nóng)藥是防控黃萎病的有效方法之一 但化學(xué)藥劑 防治存在環(huán)境污染 殘留 病原抗藥性等問題 因 此開發(fā)人畜無害 對環(huán)境友好的微生物制劑對黃萎 病防控具有重要意義 目前 已發(fā)現(xiàn)多種生防菌對大麗輪枝菌具有良好 的抑制作用 如特基拉芽胞桿菌 對馬鈴薯黃萎病的防效可達到 以上 室 內(nèi)防效試驗顯示 多黏類芽胞桿菌 能夠延遲病害的發(fā)生 同時對棉花具有一 定的促生作用 解淀粉芽胞桿菌 對作物黃萎病具有良好的防效 還 有一些內(nèi)生真菌對大麗輪枝菌具有拮抗作用 研究較 多的是木霉屬 如哈茨木霉 綠色木霉 棘孢木霉 等均能夠 有效防治黃萎病菌對番茄 橄欖等的危害 并伴有促 生作用 此外 有研究發(fā)現(xiàn) 一些非致病性鐮刀 菌對大麗輪枝菌有一定的抑制作用 比如尖鐮孢 能夠在茄子根莖有效定 殖 并能減少大麗輪枝菌在根部的定殖 從而減輕黃 萎病的發(fā)生 目前也有一些生防菌制備成可濕性 粉劑被應(yīng)用于生產(chǎn)實踐 如芽胞桿菌 的生防制劑拌土后能有效降低茄子黃萎病 的發(fā)病癥狀 枯草芽胞桿菌 在棉 花 向日葵等作物黃萎病的防控上也取得了顯著的效 果 此外 有研究表明 由于自然環(huán)境的多樣性 及復(fù)雜性 多種生防菌按一定比例混合使用 能夠起到 比單獨使用一種生防菌更好的效果 如特基拉芽 胞桿菌 和鞘氨醇桿菌 復(fù) 配使用不僅能夠高效抑制黃萎病菌的生長 還能激 活寄主植物的防御反應(yīng) 從而顯著提高寄主棉花對 大麗輪枝菌的抗性 我國黃萎病危害尤為嚴(yán)重 特別是近年農(nóng)業(yè)種 植結(jié)構(gòu)調(diào)整加劇了黃萎病病原的變異 亟須篩選新 的對黃萎病具有防控效果的生防菌株并進行防控效 果評價 為最終在生產(chǎn)上防控黃萎病提供理論和數(shù) 據(jù)支撐 為此 本研究以分離自棉花 可顯著抑制大 麗輪枝菌生長的生防菌株 為研究對象 通 過對不同基因型 落葉型和非落葉型 大麗輪枝菌的 抑菌效果測定 可濕性粉劑的制備以及制劑對煙草 和棉花黃萎病的抑制效果測定等試驗 評價該菌株 制劑對黃萎病的防效 為該菌劑后期配方優(yōu)化及在 黃萎病防治中的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù) 材料和方法 材料 供試菌株 供試的大麗輪枝菌包括兩種基因型 分別為強致病力落葉型 本實驗室保存 和中 等致病力非落葉型 來自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉 花研究所 芽胞桿菌 分離自新疆黃萎病 棉田生長正常的棉株 供試培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基 試劑 硅藻土 中位粒徑 十二烷基磺 酸鈉 木質(zhì)素磺酸鈉 羧甲基纖維素鈉 維生素 植 物 快 速 提 取 試 劑 盒 原 平 皓 北 京 全式 金 北京 主要儀器 鼓風(fēng)式干燥機 氣流粉碎機 供試寄主植物 煙草 棉花 品種為 軍棉 號 均選取長勢 一致 狀態(tài)良好 生長 周的幼苗作為測試對象 微生物培養(yǎng) 將 保存的 劃線于 固體培養(yǎng) 基上 培養(yǎng)活化 挑取單菌落接種于 液體培 養(yǎng)基 過夜培養(yǎng)作為種子液 再以 的接種量轉(zhuǎn)接于新鮮的 液 體 培 養(yǎng) 基 中 條件下培養(yǎng) 得到發(fā)酵液 分別取 保存于 的大麗輪枝菌 和 接種于 固體培養(yǎng)基上 恒溫培養(yǎng) 挑取菌落接種于完全液體培養(yǎng)基 酵母提取物 酸水解酪蛋白 蔗 糖 中 培養(yǎng) 過濾收集 孢子 并將孢子濃度調(diào)至 個 備用 菌株 分子鑒定 通過 擴增 基因序列 擴增引物序列如下 擴增體系為 模板 基因 序列通用簡并引物各 擴增條件 預(yù)變性 變性 退火 延伸 共 次循環(huán) 最后 延伸 菌株 抑菌活性測定 采用 打孔器打取大麗輪枝菌 和 菌餅 置于 的 平板中心 恒溫培養(yǎng) 在距離菌落邊緣 處接種芽胞 桿菌 于 恒溫繼續(xù)培養(yǎng) 觀察菌落 生長情況 測量大麗輪枝菌菌落直徑以及生防菌菌 落邊緣與大麗輪枝菌菌落邊緣的垂直距離 即抑菌 帶距離 計算生防菌 對 和 菌落擴展的抑制率 計算公式如下 抑菌率 抑菌帶距離 對照菌落半徑 對照菌落半徑 生防菌 可濕性粉劑制備 將種子液以 的量加入新鮮 液體培養(yǎng)基 中 條件下培養(yǎng) 得到發(fā)酵液 向 載體硅藻土中添加 發(fā)酵液 直至硅 藻土完全濕潤不再吸附 將得到的混合物鼓風(fēng)干燥 后經(jīng)氣流粉碎 得到吸附量為 的母粉 向 母粉中添加不同比例的潤濕劑 十二烷基磺酸鈉 木 質(zhì)素磺酸鈉 分散劑 羧甲基纖維素鈉 等助劑混勻 后經(jīng)氣流粉碎機粉碎 得到可濕性粉劑 可濕性粉劑質(zhì)量檢測 制劑中活芽胞含量參照 中 描述的方法 潤濕時間參照國標(biāo) 中的方法測定 懸浮率參照國標(biāo) 中的方法測定 雜菌率參照 中的 方法測定 值按國標(biāo) 中的方法測 定 細度按國標(biāo) 中的方法測定 干 燥減量參照 中的方法測定 可濕性粉劑活性測定 稱取 可濕性粉劑 溶于 無菌水中 混勻配制成粉劑懸液備用 同時 以商業(yè)化芽胞桿菌可濕性粉劑 作為對照 選取長勢一致的健康煙草幼苗以及棉花幼苗若干 均分成 組 每組 懸液 處理 接種濃度為 個 的 孢子懸浮液 處理 先澆灌商 業(yè)化可濕性粉劑 懸液 后再次接種 個 的 孢子懸浮液 處理 只澆灌商業(yè)化 可濕性粉劑 懸液 作為處理 的對照 處理 為先澆灌可濕性粉劑 后再次接種 個 的 孢子懸浮液 處理 只澆灌可 濕性粉劑 懸液 作為處理 的對照 剩 余一組作為空白對照 只定期澆水 接種 后進行病情觀察 使用苗期 級分級法進行調(diào) 查 級 植株未表現(xiàn)出黃萎病癥狀 級 片子 葉出現(xiàn)輕微黃萎病癥狀 級 片真葉出現(xiàn)輕微黃 萎病病癥 級 片及以上真葉出現(xiàn)明顯病癥 級 整株出現(xiàn)嚴(yán)重黃萎病病癥或枯死 病情指數(shù) 各級病株數(shù) 該病級值 調(diào)查 總株數(shù) 最高級值 煙草和棉花莖基部大麗輪枝菌定殖檢測 分別取各處理煙草 棉花的莖基部 根莖結(jié)合部 位 表面清洗干凈后剪碎混勻 液氮速凍后保存于 備用 各處理取 的根莖結(jié)合部組織并提 取基因組 將各樣品 濃度調(diào)至 分別以煙草 棉花管家基因 為內(nèi)參基 因 大麗輪枝菌的延伸因子 作為靶標(biāo)基 因 通過定量 檢測大麗輪枝菌靶標(biāo)基因 的相對值 即大麗輪枝菌的相對含量 定 量引物序列見表 表 煙草和棉花根莖部位大麗輪枝菌定量檢測引物 引物名稱 序列 反應(yīng) 體 系 模 板 引 物 各 煙草根部生防菌 的測定 以煙草根際生防菌定殖檢測為例 分別取各處 理煙草的根部 表面消毒后剪碎混勻 分別稱取 各處理的根部組織 加 無菌水研磨 濾掉植 卷第 期 紀(jì)曉彬等 芽胞桿菌 對大麗輪枝菌抑制效果研究 物碎渣 取 上 清 液 進 行 梯 度 稀 釋 涂 板 次 日 統(tǒng) 計 菌落數(shù) 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 采用 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析 采用 及 作圖 結(jié)果與分析 菌株 的 序列分析 通過 擴增獲得 的 基因序列長 度為 將該序列在 進行 比對 結(jié)果顯示其與貝萊斯芽胞桿菌 的 序列一致性達 選取大腸桿菌 的 基因序列 為外群 利用 軟件 采用鄰接法 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育 樹 結(jié)果表明 菌株 與貝萊斯芽胞桿菌聚在 一個分支 圖 以上結(jié)果表明 該生防菌株屬于芽胞 桿菌屬 并且與貝萊斯芽胞桿菌進化關(guān)系最近 推測 其可能是貝萊斯芽胞桿菌 圖 基于 基因序列構(gòu)建菌株 的系統(tǒng)發(fā)育樹 菌株 抑菌活性測定 平板抑菌結(jié)果表明 對 種基因型大麗 輪枝菌 強致病力落葉型 和中等致病力非落 葉型 的菌落擴展均有顯著的抑制作用 圖 進一步通過測量抑菌帶距離 統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn) 對大 麗 輪 枝 菌 有 顯 著 的 抑 制 作 用 圖 計算得到生防菌 對 和 菌落擴展的抑制率分別可達 和 可濕性粉劑制備及質(zhì)量檢測 對添加不同比例的十二烷基磺酸鈉 木質(zhì)素磺 酸鈉 羧甲基纖維素鈉及維生素 的母粉的潤濕性 及懸浮率進行測定 結(jié)果表明 芽胞桿菌 可 濕性粉劑 優(yōu)化制備方法為 向載體硅 藻土中添加搖瓶發(fā)酵液直至硅藻土完全濕潤不再吸 附 將得到的混合物鼓風(fēng)干燥后經(jīng)氣流粉碎得到母 粉 再加入助劑十二烷基磺酸鈉 木質(zhì)素磺酸鈉 羧甲基纖維素鈉 以及紫外保護劑維生素 經(jīng)氣流粉碎機混合均勻 該配方得到的制劑活 芽胞量為 潤濕時間 懸浮率為 雜菌率為 值為 細度通 過率 干燥減量 表 圖 對大麗輪枝菌的抑制效果檢測 表 可濕性粉劑 質(zhì)量檢測 指標(biāo)名稱 潤濕時間 懸浮率 雜菌率 細度 干燥減量 國家標(biāo)準(zhǔn)值 實際測定值 可濕性粉劑活性測定 以煙草和棉花為測試對象對可濕性粉劑 對黃萎病的防效進行測定 結(jié)果顯示 單獨 接種 的處理組煙草植株弱小 株高增長緩慢 或停滯 葉片發(fā)黃枯萎至死亡 莖基部剖面圖顯示莖 基部維管束褐化 呈現(xiàn)出典型的黃萎病癥狀 生防菌 劑 及商業(yè)化生防菌劑 兩組處理下煙草的長勢良好 和空白對照 組基本一致 表現(xiàn)出良好的黃萎病防控效果 單獨接 種生防菌劑 的煙草長勢正常 莖基部維 管束未見褐化 圖 和 對棉花黃萎病的防效 也得到類似結(jié)果 與商業(yè)化生防菌劑 相似 圖 可濕性粉劑對煙草和棉花黃萎病的防治效果檢測 卷第 期 紀(jì)曉彬等 芽胞桿菌 對大麗輪枝菌抑制效果研究 可濕性粉劑 預(yù)處理的棉花幼苗對大麗輪 枝菌表現(xiàn)出良好抗性 葉片黃化脫落明顯減輕 維管 束褐化得到緩解 圖 和 說明 對黃 萎病的防效與商業(yè)化菌劑 相當(dāng) 對不同處理條件下煙草和棉花的發(fā)病情況進行 統(tǒng)計 結(jié)果顯示 生防菌劑 及 商業(yè)化生防菌劑 兩組處理下煙草 和棉花的病情指數(shù)與單獨接種 相比 具有顯 著性差異 進一步說明生防菌劑 對黃萎病具有良好的防效 表 表 不同處理下煙草和棉花發(fā)病的病情指數(shù) 處理 病情指數(shù) 煙草 棉花 對照 同列不同小寫字母表示差異顯著 檢 驗法 煙草和棉花莖基部大麗輪枝菌定殖檢測 采用 檢 測 大 麗 輪 枝 菌 靶 基 因 在煙草和 棉花莖基部的相對拷貝數(shù) 并以此表示大麗輪枝菌 在寄主根部的生物量 進一步明確可濕性粉劑 對黃萎 病 的 防 效 結(jié) 果 表 明 單 獨 接 種大麗輪枝菌 的煙草莖基部中 的生 物量顯著高于同時接種生防菌劑 和 和大麗輪枝菌的試驗組 其中 單獨接種 的煙草莖基部菌體生物量分別是 經(jīng)商業(yè)化生防菌劑 和本試驗可濕性粉劑 處理后的 倍和 倍 圖 對棉 花的測試結(jié)果類似 單獨接種 的棉花莖基 部的生物量顯著高于 以及 處理的棉花 分別為 倍 和 倍 圖 上述結(jié)果說明可濕性粉劑 能夠有效防止大麗輪枝菌在煙草和棉花莖 基部的定殖 進而達到防控黃萎病的作用 同時 上述結(jié)果也顯示可濕性粉劑 對煙草和 棉花黃萎病具有和商業(yè)化生防菌劑 相當(dāng) 的防效 圖 可濕性粉劑 處理后煙草和棉花莖基部大麗輪枝菌 繁殖量檢測 煙草與棉花根部組織生防菌 定殖 檢測 以煙草與棉花為例對生防菌 在根部定 殖情況進行檢測 通過稀釋涂板法 統(tǒng)計不同處理 煙草和棉花根部組織內(nèi)生防菌 定殖情況 結(jié)果顯示 與商業(yè)化生防菌劑 類似 單獨 接種可濕性粉劑 和既接種可濕性粉劑 又接種病原菌的處理 煙草 和 棉 花 根 部內(nèi)生的生防菌菌落數(shù)沒有明顯差異 菌落數(shù)均在 左右 隨機挑選平板中菌落進行測序分 析 結(jié)果顯示測序菌落均為生防菌 這一結(jié) 果表明可濕性粉劑 能夠有效定殖于煙 草和棉花根系 并且病原菌對生防菌的定殖也沒有 顯著影響 圖 圖 煙草與棉花根部 生防菌的檢測 討論 芽胞桿菌屬的不同種之間親緣關(guān)系極為相近 序列很難區(qū)分 比如蘇云金桿菌 和蠟樣芽胞桿菌 的 序列僅有幾個堿基的差異 而 基因進 化速率快且不發(fā)生水平轉(zhuǎn)移 有較好的分辨率 本試驗利用該基因序列對芽胞桿菌 進行分 類鑒定 可初步將其與其他芽胞桿菌區(qū)分開 通過系 統(tǒng)發(fā)育樹分析推斷本研究的芽胞桿菌 為貝 萊斯芽胞桿菌 關(guān)于該菌株準(zhǔn)確的種屬分類尚需進 一步的分子驗證 本研究還 通 過 平 板 對 峙 試 驗 檢 測 了 對不同基因型大麗輪枝菌 和 菌落 生長的抑制效果 結(jié)果表明 具有潛在的防 控黃萎病應(yīng)用價值 可濕性粉劑是微生物農(nóng)藥中 的主要劑型 該劑型生產(chǎn)成本低 應(yīng)用范圍廣 有 研究表明在可濕性粉劑研制過程中氣流粉碎的方 法對活芽胞含量的影響十分微小 增加粉劑細度則 更有利于吸收粉劑 大大縮短潤濕時間 提高懸浮 率 本試驗也采取氣流粉碎方法對各組分進行 混合 最 終 制 劑 細 度 為 幾 乎 完 全 通 過 篩選篩 潤濕時間也大大縮短 初步得到的 生 防 菌 劑 的 活 芽 胞 數(shù) 為 后續(xù)研究為了在實際應(yīng)用中達到低劑 量 高防 效 的 目 的 還 需 進 一 步 提 高 制 劑 活 芽 胞 數(shù) 例如可以對 菌株發(fā)酵條件進行優(yōu)化 篩選該菌株最佳發(fā)酵條件 如研制生防菌 可濕性粉劑時首先對其發(fā)酵條件進行了優(yōu)化 通過 篩選 得 到 菌 量 為 億 芽 胞 桿 菌 的 菌 量 為后期得到更多生物量的生防菌劑提供了 基礎(chǔ)保 障 對 各項指標(biāo)進行測定發(fā) 現(xiàn) 除懸浮率偏低外 懸浮率為 低于國標(biāo) 值 其余各指標(biāo)均符合國標(biāo)值 針對懸浮 率不足問題 后期應(yīng)進一步選擇多種助劑進行篩 選 尤其是對分散劑的選擇 本研究以煙草及棉花幼苗為測試植物 對初步 得到的可濕性粉劑 對黃萎病的防效進 行了測定 單獨接種生防菌劑 的煙草 和棉花均能正常生長 莖基部維管束未見褐化 說 明該生防菌對植物安全無毒 為進一步確定其對人 畜也安全無毒 后期還需進一步通過一系列毒理學(xué) 試驗來確保其安全性 比如急性經(jīng)口 急性經(jīng)皮毒 性試驗 急性皮膚刺激試驗等 單獨接種 的處理組煙草和棉花幼苗的植株弱小 株高增長緩 慢或停滯 葉片發(fā)黃枯萎至死亡 莖基部維管束褐 化 而接種生防菌劑 及商業(yè)化 的生防菌劑 兩組處理下煙草和 棉花的 長 勢 良 好 和 空 白 對 照 組 基 本 一 致 說 明 對室內(nèi)煙草和棉花黃萎病的發(fā)生具有 卷第 期 紀(jì)曉彬等 芽胞桿菌 對大麗輪枝菌抑制效果研究 良好的防效 且效果與商業(yè)化菌劑 相當(dāng) 同時 經(jīng)生防菌劑處理的煙草和棉花的根莖結(jié)合部 位組織 僅 能 檢 測 到 少 量 的 大 麗 輪 枝 菌 對 接 種 的煙草根際生防菌的檢測發(fā) 現(xiàn) 生 防 菌能夠在根際有效定殖 并且不受后來入侵的病原 菌大麗輪枝菌制約 說明 菌株具有良好的 生防應(yīng)用前景 參考文獻 馬存 簡桂良 孫文姬 我國棉花品種抗黃萎病鑒定存在的問 題及對策 棉花學(xué)報 申建芳 東北 華北馬鈴薯黃萎病病原菌分離鑒定和遺傳多樣 性及生物防治的初步研究 呼 和 浩 特 內(nèi) 蒙 古 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 李曉林 防治棉花黃萎病生防菌的篩選及其另一個新病原菌 的發(fā)現(xiàn) 杭州 浙江大學(xué) 趙衛(wèi)松 李社增 鹿秀云 等 解淀粉芽孢桿菌 對 小麥的促生作用及產(chǎn)量影響 中國生物防治學(xué)報 李廣華 李虎 戴愛海 億活芽孢 克枯草芽孢桿菌可濕 性粉劑防治棉花黃萎病大田試驗 新疆農(nóng)業(yè)科技 朱統(tǒng)國 王曙文 李曉偉 等 向日葵黃萎病綜合防控技術(shù)研 究 山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 許艷麗 張紅驥 張勻華 等 復(fù)配生防菌株防治大豆根腐病 的研究 大豆科學(xué) 譚兆贊 林捷 劉可星 等 復(fù)合微生物菌劑對番茄青枯病和 土壤微生物多樣性的影響 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 李國 趙輝 劉元元 等 多元混菌培養(yǎng)對棉花黃萎菌拮抗效 果的研究 中國生物防治學(xué)報 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 細菌微生物農(nóng) 藥枯草芽孢桿菌第一部分 枯草芽孢桿菌母藥 北京 中國 標(biāo)準(zhǔn)出版社 中華人民共和國國家石油和化學(xué)工業(yè)局 農(nóng)藥可濕性粉劑潤濕性測定方法 北京 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 中國石油和化學(xué)工業(yè)學(xué)會 農(nóng)藥懸浮率測 定方法 北京 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 中華人民共和國化學(xué)工業(yè)部 農(nóng)藥 值測 定方法 北京 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 中華人民共和國國家化學(xué)工業(yè)部 農(nóng)藥粉 劑 可濕性粉劑細度測定方法 北 京 中 國 標(biāo) 準(zhǔn) 出 版 社 劉振華 多粘類芽孢桿菌和海洋芽孢桿菌可濕性粉劑的研制 及其加工工藝的優(yōu)化和放大 上海 華東理工大學(xué) 王劍 生防菌 發(fā)酵優(yōu)化及其可濕性粉劑 微膠囊劑的創(chuàng) 制 上海 華東理工大學(xué) 責(zé)任編輯 田 喆