2021-‘陽光玫瑰’葡萄組培脫毒快繁技術(shù)研究_林茜.pdf

DOI 10 13925 ki gsxb 20200280 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒快繁技術(shù)研究 林 茜 1 2 高營營 2 覃換玲 2 黃天琨 2 趙 宇 2 王鐘霞 2 陳淑媛 2 1 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所 南寧 530007 2 廣西植物組培苗有限公司 南寧 530007 摘 要 目的 培育 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒苗木 初步建立 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒快繁技 術(shù)體系 方法 采用MS 為 基 本 培 養(yǎng) 基 以 植 物 生 長 調(diào) 節(jié) 劑6 BA NAA 和IBA 為 變 量 接 種 后 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 的 生 長 狀 況 為 因 變 量 通 過 熱 處 理 結(jié) 合 莖 尖 培 養(yǎng) 技 術(shù) 在32 預(yù) 熱 處 理7d 再 逐 漸 升 溫 至37 熱 處 理30d 后 剝 取 莖 尖 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 待 獲 得 完 整 植 株 時 利 用RT PCR 檢 測 方 法 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 進(jìn) 行 病 毒 檢 測 結(jié) 果 陽 光 玫 瑰 葡 萄 嫩 莖 段 外 植 體 經(jīng) 75 乙 醇30s 0 1 氯 化 汞8min 處 理 外 植 體 的 污 染 率 和 褐 化 率 最 低 經(jīng) 消 毒 滅 菌 的 外 植 體 接 種 到 添 加 含 有6 BA 和 NAA 的MS 培 養(yǎng) 基 上 誘 導(dǎo) 萌 發(fā) 在1 5mg L 1 6 BA 和0 2mg L 1 NAA 的 培 養(yǎng) 基 上 萌 芽 率 最 高 將 啟 動 培 養(yǎng) 獲 得 的 無 菌 新 芽 接 種 到 含 有6 BA 和NAA 的MS 培 養(yǎng) 基 中 進(jìn) 行 繼 代 培 養(yǎng) 在1 0mg L 1 6 BA 0 1mg L 1 NAA 的 培 養(yǎng) 基 中 單 芽 增 殖 效 果 最 明 顯 把 繼 代 培 養(yǎng) 中 生 長 健 壯 的 單 芽 切 下 轉(zhuǎn) 入 添 加IBA 和NAA 的1 2MS 培 養(yǎng) 基 中 進(jìn) 行 生 根 培 養(yǎng) 在 添 加0 4mg L 1 IBA 和0 2mg L 1 NAA 的1 2MS 培 養(yǎng) 基 上 生 根 效 果 最 佳 采 用 熱 處 理 結(jié) 合 莖 尖 培 養(yǎng) 進(jìn) 行 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 的 脫 毒 處 理 熱 處 理 植 株 的 成 活 率 為78 莖 尖 成 活 率 為60 經(jīng) 檢 測 再 生 植 株 不 帶 葡 萄 卷 葉 病 毒1 GLRaV 1 葡 萄 卷 葉 病 毒3 GLRaV 3 葡 萄 病 毒A GVA 葡 萄 斑 點 病 毒 GFkV 葡 萄 扇 葉 病 毒 GFLV 結(jié) 論 初 步建立了 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒快繁技術(shù)體系 為 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒苗的工廠化生產(chǎn)提供了技術(shù)支撐 關(guān)鍵詞 陽光玫瑰 葡萄 組織培養(yǎng) 快繁 脫毒 中圖分類號 S663 1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1009 9980 2021 03 0435 09 收稿日期 2020 07 31 接受日期 2020 12 14 作 者 簡 介 林 茜 女 助 理 研 究 員 主 要 從 事 香 蕉 葡 萄 中 草 藥 等 方 面 作 物 的 組 培 及 栽 培 技 術(shù) 的 研 究 Tel 0771 3243086 E mail 657788823 通信作者Authorforcorrespondence Tel 18376788265 E mail 595249583 果 樹 學(xué) 報 2021 38 3 435 443 JournalofFruitScience Study on rapid propagation technology of virus free seedlings by tissue culturein ShineMuscat grape LIN Qian 1 2 GAO Yingying 2 QIN Huanling 2 HUANG Tiankun 2 ZHAO Yu 2 WANG Zhongxia 2 CHENShuyuan 2 1 BiotechnologyReserachInstitute GuangxiAcademyofAgriculturalSciences Nanning530007 Guangxi China 2 GuangxiPlantTissue CultureSeedlingCo LTD Nanning530007 Guangxi China Abstract Objective Shine Muscat grape with its unique advantages of seedless high sugar con tent rich rose fragrance and good flavor surpasses the quality of other grape varieties and is welcomed by consumers In recent years Shine Muscat grape has been widely introduced and planted in Zheji ang Jiangsu Anhui Yunnan Guangxi and other places showing a broad market prospect With the de velopment of grape industry the demand for Shine Muscat grape seedlings is growing rapidly How ever in the cultivation of this variety in China the plants generally show the symptoms of viral diseas es sothattheyieldandberryqualitywereseriouslyaffected Thetraditionalwayofgrapeseedlingpro ductiontoremovethevirusisinefficient Therefore itisnecessarytoestablisharapidpropagationtech nology system for virus free seedlings of Shine Muscat grape by combining tissue culture with heat treatment method Methods Based on the heat treatment method the virus free zone of the stem tip can expand by inactivating the virus and the stem tip has the advantage of taking small apical meri stems to grow a whole plant In this paper the tissue culture seedlings of Shine Muscat grape were treated by combining heat treatment with stem tip culture Firstly the stem segments with axillary bud果 樹 學(xué) 報 第38 卷 陽 光 玫 瑰 Shine Muscat 又 名 夏 音 馬 斯 卡 特 耀 眼 玫 瑰 是 日 本 果 樹 試 驗 基 地 選 育 的 葡 萄 品 種 親 本 為 安 蕓 津21 白 南 1 該 品 種 屬 二 倍 體 歐 美 雜 交 種 晚 熟 果 皮 黃 綠 色 或 黃 色 粒 大 皮 薄 可 食 肉 脆 多 汁 玫 瑰 香 味 濃 郁 可 溶 性 固 形 物 含 量 w 可 達(dá)23 達(dá) 到18 時 果 糖 高 于 葡 萄 糖 2 3 近 年 來 陽 光 玫 瑰 在 浙 江 江 蘇 安 徽 云 南 廣 西 等 地 被 廣 泛 引 種 種 植 但 該 品 種 在 我 國 各 地 栽 培 中 植 株 普 遍 表 現(xiàn) 類 似 病 毒 病 癥 狀 對 果 實 產(chǎn) 量 品 質(zhì) 造 成 嚴(yán) 重 影 響 隨 著 我 國 陽 光 玫 瑰 葡 萄 產(chǎn) 業(yè) 的 發(fā) 展 對 苗 木 的 需 求 量 也 越 來 越 大 傳 統(tǒng) 的 扦 插 嫁 接 繁 殖 雖 簡 捷 方 便 但 受 母 株 及 砧 木 的 限 制 繁 殖 數(shù) 量 有 限 育 苗 周 期 長 且 苗 木 常 攜 帶 病 毒 長 期 采 用 這 些 傳 統(tǒng)方法進(jìn)行繁殖 葡萄品種的種性也會嚴(yán)重退化 4 5 多 年 來 我 國 學(xué) 者 一 直 從 事 葡 萄 病 毒 脫 除 技 術(shù) 研 究 6 雖 然 該 技 術(shù) 已 較 為 成 熟 但 是 目 前 針 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 脫 毒 及 快 繁 方 面 的 研 究 少 有 報 道 適 合 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 脫 毒 種 苗 的 快 繁 技 術(shù) 體 系 area of new canes were used as explants and they were disinfected by different disinfection methods Then they were inoculated on MS medium containing different concentrations of plant growth regula tors Afterafewdays thepollutionrate survivalrate germinationrate subculturemultiplicationcoeffi cient rootingrate rootlengthandrootnumberofexplantswerecalculated Thebestmethodofdisinfec tion disinfection time start medium subculture medium rooting medium for explants was determined Secondly when robust tissue culture seedlings were obtained they were heat treated at different culture temperaturesanddurations Attheendoftreatment thestemtipswereselectedandculturedtogrowin to intact plants Finally the tube seedlings were sent to qualified institutions for virus detection by RT PCR detection Results After disinfection with 75 alcohol for 30 s and 0 1 mercuric chloride for 8 min the contamination rate and browning rate of stem explants were the lowest and the survival rate was 86 the explants were inoculated on MS medium containing 6 BAand NAAto induce germina tion and the highest germination rate was on MS medium containing 6 BA 1 5 mg L 1 and NAA 0 2 mg L 1 which reached 86 4 the sterile buds were inoculated on MS medium containing 6 BA and NAA On the medium containing 1 0 mg L 1 6 BA 0 1 mg L 1 NAA the effect of proliferation was the most obvious in the subculture and the multiplication coefficient was 3 5 from subculture the sin gle buds with strong growth were separated and transferred onto the medium of 1 2MS with IBA and NAAfor proliferation and rooting and the effect of rooting was the best on the medium of 1 2MS with IBA0 4 mg L 1 and NAA0 2 mg L 1 the rooting rate was 86 the average number of roots was 4 13 and the average root length was 3 89 cm detoxification treatment of tissue culture seedlings by heat treatment was combined with shoot tip culture After 18 days of heat treatment at 37 individual plants began to gradually lose their green leaves and became withered and finally the whole plant died The survival rate of heat treated plants was 78 and the shoot tip survival rate was 60 The results showed that regenerated plants did not contain grape leaf curl virus 1 GLRaV 1 grape leaf curl virus 3 GLRaV 3 grapevirusA GVA grapespotvirus GFkV andgrapefanleafvirus GFLV Conclu sion Through the technology of plant tissue culture the production efficiency of grape seedlings could be improved effectively At the same time using heat treatment combined with detoxification technolo gyofstemtipculture thedetoxificationefficiencyofvirusinthetissuecultureseedlingwasalsogreat ly improved Therefore this study preliminarily established the technology system of tissue culture and detoxification and rapid reproduction of Shine Muscat grape Moreover it can provide technical sup port for the factory production of detoxification tissue culture seedling of Shine Muscat grape It can also provide the market with high quality robust virus free excellent characteristics of virus free ShineMuscat tissuecultureseedlings Keywords ShineMuscat grape Tissueculture Rapidpropagation Virus free 436 等 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒快繁技術(shù)研究 第3 期 還 未 建 立 國 內(nèi) 當(dāng) 前 并 未 見 葡 萄 良 繁 體 系 的 大 規(guī) 模 建 設(shè) 和 推 廣 市 面 上 可 供 銷 售 的 脫 毒 葡 萄 苗 木 數(shù) 量 極其有限 7 因 此 筆 者 以 陽 光 玫 瑰 葡 萄 品 種 為 試 驗 材 料 擬 通 過 探 索 外 植 體 消 毒 啟 動 培 養(yǎng) 增 殖 培 養(yǎng) 生 根 培 養(yǎng) 熱 處 理 結(jié) 合 莖 尖 脫 毒 等 環(huán) 節(jié) 的 關(guān) 鍵 技 術(shù) 初 步 建 立 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 脫 毒 快 繁 技 術(shù) 體 系 以 期 加 快 陽 光 玫 瑰 葡 萄 優(yōu) 質(zhì) 種 苗 的 市 場 供 應(yīng) 量 使 該 品 種 能 得 到 大 面 積 的 推 廣 應(yīng) 用 從 而 促 進(jìn) 我 國 陽 光 玫瑰 葡萄產(chǎn)業(yè)的健康有序發(fā)展 1 材料和方法 1 1 材料 供 試 材 料 為2019 年4 月 份 采 集 的 陽 光 玫 瑰 葡 萄 優(yōu) 株 當(dāng) 年 生 嫩 枝 條 由 廣 西 植 物 組 培 苗 有 限 公 司 種植示范地提供 1 2 方法 1 2 1 外 植 體 采 集 及 消 毒 于 連 續(xù) 晴 朗 的 午 后 取 生 長 健 壯 植 株 的 新 生 帶 腋 芽 莖 段 分 割 成3cm 左 右 大 小 腋 芽 上 端1 cm 下 端2 cm 在 超 凈 工 作 臺 上 采 用 不 同 的 消 毒 方 式 表1 對 莖 段 進(jìn) 行 表 面 消 毒 消 毒 后 用 無 菌 水 沖 洗4 5 次 無 菌 濾 紙 吸 干 其 表 面 水 分 兩 端 分 別 切 除5mm 左 右 后 接 種 于 相 應(yīng) 的 啟 動 培 養(yǎng) 基 上 每 消 毒 方 式 處 理 外 植 體100 個 培 養(yǎng) 期 間 發(fā) 現(xiàn) 外 植 體 出 現(xiàn) 褐 化 污 染 等 現(xiàn) 象 及 時 記 錄 數(shù) 據(jù) 莖 段 離 體 培 養(yǎng) 兩 周 后 褐 化 污 染 情 況 趨 于 穩(wěn) 定 觀 察 并 統(tǒng) 計 褐 化 污 染 的 外 植 體 總 數(shù) 計 算 污 染 率 褐化率及成活率 表1 陽光玫瑰 葡萄外植體消毒處理 Table1 Disinfectionofexplantsof ShineMuscat 處理編號 Processnumber 1D 2D 3D 4D 5D 6D 7D 8D 9D 10D 11D 12D 75 乙醇消毒時間 75 alcohol disinfectiontime s 0 0 0 0 30 30 30 30 60 60 60 60 0 1 氯化汞消毒時間 0 1 mercurychloride disinfectiontime min 6 8 10 12 6 8 10 12 6 8 10 12 1 2 2 啟 動 培 養(yǎng) 將 消 毒 處 理 后 的 外 植 體 接 種 于 含 有 不 同 植 物 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 組 合 的MS 培 養(yǎng) 基 中 表2 促 其 腋 芽 萌 發(fā) 每 配 方 接 種 外 植 體100 個 莖 段 離 體 培 養(yǎng)20d 腋 芽 萌 發(fā) 情 況 穩(wěn) 定 此 時 觀 察 并 統(tǒng) 計 外 植 體 萌 芽 數(shù) 計 算 萌 芽 率 培 養(yǎng) 條 件 溫 度 25 2 光 照 度2500 3000 lx 每 天 光 照 時 間12 h 下 同 表2 陽光玫瑰 葡萄外植體啟動培養(yǎng)基 Table2 Theestablishmentmediumof ShineMuscat explants 處理編號 Processnumber 1P 2P 3P 4P 5P 6P 7P 8P 9P 10P 11P 12P 基本培養(yǎng)基 Basicmedium MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS 6 BA 6 BA mg L 1 0 5 0 5 0 5 1 0 1 0 1 0 1 5 1 5 1 5 2 0 2 0 2 0 NAA NAA mg L 1 0 1 0 2 0 3 0 1 0 2 0 3 0 1 0 2 0 3 0 1 0 2 0 3 1 2 3 繼 代 培 養(yǎng) 將 經(jīng) 啟 動 培 養(yǎng) 獲 得 的 無 菌 單 芽 接 種 于 含 有 不 同 植 物 生 長 調(diào) 節(jié) 劑 組 合 的 繼 代 培 養(yǎng) 基 中 表3 誘 導(dǎo) 不 定 芽 產(chǎn) 生 每 配 方 接 種 單 芽100 個 培 養(yǎng)60d 觀 察 并 統(tǒng) 計 每 個 接 種 單 芽 的 總 芽 數(shù) 計算增殖系數(shù) 表3 陽光玫瑰 葡萄繼代培養(yǎng)基 Table3 Thesubculturemediumof ShineMuscat 處理編號 Processnumber 1S 2S 3S 4S 5S 6S 7S 8S 9S 10S 11S 12S 基本培養(yǎng)基 Basicmedium MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS 6 BA 6 BA mg L 1 0 5 0 5 0 5 1 0 1 0 1 0 1 5 1 5 1 5 2 0 2 0 2 0 NAA NAA mg L 1 0 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 2 1 2 4 生 根 培 養(yǎng) 將 繼 代 培 養(yǎng) 中 株 高1 5 2 0cm 枝 葉 舒 展 的 單 芽 切 下 接 種 于 不 同 的 生 根 培 養(yǎng) 基 中 表 4 每 生 根 配 方 接 種100 株 培 養(yǎng)30 d 觀 察 并 記 錄 林 茜 437果 樹 學(xué) 報 第38 卷 各單株的生根條數(shù) 根長等數(shù)據(jù) 計算生根率 表4 陽光玫瑰 葡萄生根培養(yǎng)基 Table4 Therootingmediumof ShineMuscat 處理編號 Processnumber 1R 2R 3R 4R 5R 6R 7R 8R 9R 10R 11R 12R 13R 14R 15R 基本培養(yǎng)基 Basicmedium 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS IBA IBA mg L 1 0 0 0 0 0 0 0 2 0 2 0 2 0 2 0 4 0 4 0 4 0 4 0 6 0 6 0 6 0 6 NAA NAA mg L 1 0 2 0 4 0 6 0 0 0 2 0 4 0 6 0 0 0 2 0 4 0 6 0 0 0 2 0 4 0 6 1 2 5 組 培 脫 毒 技 術(shù) 及 病 毒 檢 測 將 生 長 勢 較 好 的 陽 光 玫 瑰 葡 萄 待 脫 毒 試 管 苗100 株 轉(zhuǎn) 接 到 新 鮮 的 生 根 培 養(yǎng) 基 中 先 在 室 溫 條 件 下 培 養(yǎng)15d 然 后 轉(zhuǎn) 移 至 恒 溫 培 養(yǎng) 箱 中 32 培 養(yǎng) 7 d 再 逐 漸 升 溫 至 37 熱 處 理30d 后 剝 取 2mm 莖 尖 轉(zhuǎn) 接 到 新 配 制 的 生 根 培 養(yǎng) 基 中 6 生 根 培 養(yǎng) 基 為 1 2MS 0 4mg L 1 IBA 0 2mg L 1 NAA 成 活 的 莖 尖 繼 代4 5 次 每 個 莖 尖 培 養(yǎng) 獲 得 的 植 株 數(shù) 量 達(dá)5 7 瓶 每 瓶6 株 時 將 陽 光 玫 瑰 葡 萄 試 管 苗 送 往 中 國 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 果 樹 研 究 所 國 家 落 葉 果 樹 脫 毒 中 心 進(jìn) 行 葡 萄 卷 葉 病 毒1 GLRaV 1 葡 萄 卷 葉 病 毒3 GLRaV 3 葡 萄 病 毒A GVA 葡 萄 斑點 病毒 GFkV 葡萄 扇葉 病毒 GFLV 的檢 測 單 樣 送 檢 植 株 數(shù) 量 為10 株 病 毒 檢 測 方 法 為 反 轉(zhuǎn) 錄 聚合酶鏈反應(yīng) RT PCR 1 3 數(shù)據(jù)處理 采 用Excel2013 進(jìn) 行 數(shù) 據(jù) 處 理 及 制 圖 用SPSS 19 0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析 2 結(jié)果與分析 2 1 不 同 消 毒 方 式 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 體 成 活 率的影響 由 表5 可 知 不 同 消 毒 方 式 對 外 植 體 成 活 率 的 影 響 不 同 只 使 用0 1 氯 化 汞 消 毒 外 植 體 的 污 染 率 均 高 于 使 用75 乙 醇 與0 1 氯 化 汞 組 合 的 方 式 而 兩 種 消 毒 液 組 合 消 毒 時 以75 乙 醇 消 毒 時 間 為 30s 時 最 佳 0 1 氯 化 汞 不 同 的 消 毒 時 間 對 葡 萄 外 植 體 的 污 染 率 及 褐 化 率 影 響 較 為 明 顯 隨 著 消 毒 時 間 的 延 長 外 植 體 污 染 率 降 低 但 褐 化 率 明 顯 升 高 從 而 降 低 成 活 率 故 陽 光 玫 瑰 葡 萄 腋 芽 莖 段 外 植 體 的 最 佳 消 毒 方 式 為6D 75 乙 醇30 s 0 1 氯 化 汞8min 外植體成活率86 2 2 不 同 培 養(yǎng) 基 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 體 萌 芽 率 的影響 由 圖1 可 知 不 同 啟 動 培 養(yǎng) 基 對 外 植 體 的 萌 芽 率 影 響 不 同 隨 著 培 養(yǎng) 基 中6 BA 濃 度 的 升 高 陽 表5 不同消毒方式對 陽光玫瑰 葡萄外植體成活率的影響 Table5 Theeffectofdifferentdisinfectionmethodsonthesurvivalrateof ShineMuscat explants 處理編號 Processnumber 1D 2D 3D 4D 5D 6D 7D 8D 9D 10D 11D 12D 外植體數(shù) Numberof explants 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 污染數(shù) Numberof pollution 44 38 27 27 28 11 16 17 29 26 15 12 污染率 Pollution rate 44 38 27 27 28 11 16 17 29 26 15 12 褐化數(shù) Browning number 1 2 5 8 2 3 6 10 2 3 8 14 褐化率 Browning rate 1 2 5 8 2 3 6 10 2 3 8 14 成活數(shù) Survival number 55 60 68 65 70 86 78 73 69 71 77 74 成活率 Survivalrate 55g 60f 68de 65e 70d 86a 78b 73cd 69d 71cd 77bc 74c 注 表中不同小寫字母表示不同處理之間差異達(dá)顯著水平 p 0 05 下同 Note Differentsmalllettersinthetableindicatedthatthedifferencebetweendifferenttreatmentswassignificant p 0 05 Thesamebelow 438 等 陽光玫瑰 葡萄組培脫毒快繁技術(shù)研究 第3 期 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 體 萌 芽 率 整 體 呈 先 上 升 后 下 降 的 趨 勢 在 相 同6 BA 質(zhì) 量 濃 度 水 平 下 隨 著NAA 質(zhì) 量 濃 度 的 升 高 外 植 體 萌 芽 率 也 同 樣 表 現(xiàn) 出 先 上 升 后 下 降 試 驗 發(fā) 現(xiàn) 培 養(yǎng) 基 編 號4P 5P 7P 8P 9P 10P 11P 中 外 植 體 萌 芽 率 均 在60 以 上 培 養(yǎng) 基 編 號8P 中 的 外 植 體 萌 芽 率 最 高 為86 4 且 與 其 他 編 號 啟 動 培 養(yǎng) 基 中 的 外 植 體 萌 芽 率 呈 顯 著 性 差 異 故 陽 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 體 最 佳 腋 芽 啟 動 培 養(yǎng) 基 為8P MS 1 5mg L 1 6 BA 0 2mg L 1 NAA 2 3 不 同 培 養(yǎng) 基 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 繼 代 增 殖的影響 由 圖2 可 看 出 不 同 繼 代 培 養(yǎng) 基 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 繼 代 增 殖 的 影 響 不 同 當(dāng) 培 養(yǎng) 基 中6 BA 質(zhì) 量 濃 度 為0 5mg L 1 時 單 芽 的 增 殖 系 數(shù) 均 較 低 不 足1 5 隨 著6 BA 質(zhì) 量 濃 度 的 升 高 芽 的 增 殖 系 數(shù) 先 上 升 后 下 降 當(dāng)6 BA 質(zhì) 量 濃 度 升 至1 5mg L 1 f d d c a b f e e h g h 圖1 不同培養(yǎng)基對 陽光玫瑰 葡萄外植體萌芽率的影響 Fig 1 Theeffectofdifferentculturemediumonthegerminationrateof ShineMuscat explants l i h g f e d b a c k j 圖2 陽光玫瑰 葡萄組培苗在不同培養(yǎng)基上的增殖系數(shù) Fig 2 Themultiplicationcoefficientof ShineMuscat tissuecultureseedlingsondifferentmedia 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 外植體萌芽率 Germinationrateofexplants 1P 2P 3P 4P 5P 6P 7P 8P 9P 10P 11P 12P 處 理編號 Processnunber 及 以 上 時 芽 的 增 殖 明 顯 受 到 抑 制 且 試 驗 中 發(fā) 現(xiàn) 此 質(zhì) 量 濃 度 培 養(yǎng) 的 芽 質(zhì) 脆 玻 璃 化 現(xiàn) 象 明 顯 并 出 現(xiàn) 肥大不 規(guī)則葉 片 而當(dāng)6 BA 質(zhì)量濃 度為1 0mg L 1 時 芽 的 增 殖 系 數(shù) 均 略 高 叢 芽 長 勢 正 常 翠 綠 健 壯 活 力 佳 另 外 6 BA 需 配 合 低 質(zhì) 量 濃 度 的NAA 一 起 使 用 即 兩 者 質(zhì) 量 濃 度 比 為10 1 時 增 殖 效 果 最 佳 故 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 最 佳 繼 代 增 殖 培 養(yǎng) 基 為5S MS 1 0mg L 1 6 BA 0 1mg L 1 NAA 2 4 不 同 培 養(yǎng) 基 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 生 根 的 影響 從 表6 可 知 不 同 的 生 根 培 養(yǎng) 基 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 的 生 根 率 根 條 數(shù) 及 根 長 影 響 不 同 當(dāng) 培 養(yǎng) 基 中 單 獨 添 加 不 同 質(zhì) 量 濃 度 生 長 素NAA 時 單 株 的 生 根 率 根 數(shù) 均 較 低 而 單 獨 添 加 不 同 質(zhì) 量 濃 度 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 1 0 0 5 0 0 增殖系數(shù) Proliferationrate 處理編號 Processnunber 1S 2S 3S 4S 5S 6S 7S 8S 9S 10S 11S 12S 林 茜 439果 樹 學(xué) 報 第38 卷 生 長 素IBA 時 單 株 的 生 根 情 況 較 好 可 見 生 長 素IBA 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 生 根 的 誘 導(dǎo) 效 果 強(qiáng) 于NAA 但 經(jīng) 試 驗 培 養(yǎng) 發(fā) 現(xiàn) 將IBA 與 低 質(zhì) 量 濃 度 的NAA 搭 配 使 用 比 單 獨 使 用IBA 更 能 明 顯 提 高 組 培 苗 的 生 根 率 增 加 單 株 根 條 數(shù) 及 側(cè) 根 數(shù) 量 根 系 潔 白 健 壯 有 活 力 故 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 的 最 佳 生 根 培 養(yǎng) 基 為9R 1 2MS 0 4mg L 1 IBA 0 2mg L 1 NAA 2 5 熱處理及植株再生 本 研 究 通 過 熱 處 理 結(jié) 合 莖 尖 培 養(yǎng) 技 術(shù) 進(jìn) 行 陽 光 玫 瑰 葡 萄 組 培 苗 的 脫 毒 處 理 研 究 過 程 中 發(fā) 現(xiàn) 37 熱 處 理18 d 個 別 植 株 開 始 出 現(xiàn) 葉 片 逐 漸 失 綠 變 枯 最 終 整 株 死 亡 的 現(xiàn) 象 熱 處 理30d 時 試 管 苗 的 最 終 成 活 率 為78 熱 處 理 完 成 后 切 取 植 株 2mm 莖 尖 進(jìn) 行 室 溫 下 培 養(yǎng) 圖3 10 15d 莖 尖 開 始 陸 續(xù) 恢 復(fù) 生 長 約60d 可 長 成 完 整 植 株 未 恢 復(fù) 的 莖 尖 約30 d 開 始 失 綠 死 亡 莖 尖 最 終 成 活 率 為60 表7 2 6 陽光玫瑰 葡萄組培苗的病毒檢測 對 陽 光 玫 瑰 葡 萄 試 管 苗 進(jìn) 行 病 毒 檢 測 圖4 檢 測 結(jié) 果 表 明 送 檢 的 陽 光 玫 瑰 葡 萄 試 管 苗 不 含 有 葡 萄 卷 葉 病 毒1 GLRaV 1 葡 萄 卷 葉 病 毒3 GL RaV 3 葡 萄 病 毒A GVA 葡 萄 斑 點 病 毒 GFkV 表6 不同培養(yǎng)基對 陽光玫瑰 葡萄組培苗生根的影響 Table6 Theeffectsofdifferentmediaonrootingof ShineMuscat plantlets 處理編號 Processnumber 1R 2R 3R 4R 5R 6R 7R 8R 9R 10R 11R 12R 13R 14R 15R 接種株數(shù) Numberofinoculations 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 生根 株數(shù) Rootnumber 8 7 5 29 35 58 40 57 86 74 66 55 75 58 49 生根率 Rootingrate 8j 7k 5l 29i 35h 58d 40g 57de 86a 74b 66c 55e 75b 58d 49f 平均根數(shù) Averagenumberofroot 1 87j 1 85j 1 70k 2 15hi 2 43g 2 20h 1 85j 3 48c 4 13a 3 81b 3 60c 2 64f 3 15d 2 83e 2 05i 平均根長 Averagerootlength cm 2 53f 2 50fg 2 39g 2 67e 2 93d 3 13c 3 27c 3 43bc 3 89a 3 90a 3 53b 2 78e 3 53b 3 28c 2 97d 表7 熱處理試管苗及莖尖成活率 Table7 Thesurvivalrateofheattreatmenttubeseedlingandstemtip 熱處理試管苗成活情況 Survivalofheat treatedtubeseedlings 熱處理 株 數(shù) Numberofheat treated 100 成活 株數(shù) Survivalnumber 78 成活率 Survivalrate 78 莖尖成活情況 Stemtipsurvival 切取數(shù) Numberofcut 78 成活數(shù) Survivalnumber 47 成活率 Survivalrate 60 A Cultivatefor1day B Cultivatefor30days 圖3 陽光玫瑰 葡萄組培苗莖尖培養(yǎng) Fig 3 Thestemtipcultureof ShineMuscat grapetissuecultureseed