苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖亩玖皩?duì)其所致辣椒炭疽病的防效.pdf

植物保護(hù)學(xué)報(bào)JournalofPlantProtection 2023 50 3 830 838 DOI 10 13802 ki zwbhxb 2023 2021220 基金項(xiàng)目 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃 2022YFD1700504 山東省蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 SDAIT 05 通信作者 Authorforcorrespondence E mail fliu 收稿日期 2021 12 15 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖亩玖?及對(duì)其所致辣椒炭疽病的防效 王愛萍 1 席淑文 1 張國(guó)福 2 丁紹武 3 禾麗菲 1 慕 衛(wèi) 1 劉 峰 1 1 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院 山東省高校農(nóng)藥毒理與應(yīng)用技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 泰安271018 2 山東省農(nóng)藥檢定所 濟(jì)南250000 3 濟(jì)南天邦化工有限公司 濟(jì)南250000 摘 要 為 評(píng) 價(jià) 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 防 治 潛 力 采 用 菌 絲 生 長(zhǎng) 速 率 法 和 孢 子 萌 發(fā) 法 分 別 測(cè) 定 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì)108 株 辣 椒 炭 疽 病 病 原 菌 尖 孢 炭 疽 菌Colletotrichum acutatum 菌 株 菌 絲 生 長(zhǎng) 和 孢 子 萌 發(fā) 的 抑 制 活 性 通 過 辣 椒 活 體 接 種 試 驗(yàn) 比 較 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 和 相對(duì)治療防效 測(cè)定其對(duì)辣椒炭疽病的室內(nèi)相對(duì)防效和田間相對(duì)防效 結(jié)果表明 苯并烯氟菌唑?qū)?尖 孢 炭 疽 菌 孢 子 萌 發(fā) 的 抑 制 活 性 高 于 對(duì) 其 菌 絲 生 長(zhǎng) 的 抑 制 活 性 對(duì) 孢 子 萌 發(fā) 及 對(duì) 菌 絲 生 長(zhǎng) 的 有 效 抑 制 中 濃 度EC 50 分 別 為0 005 0 196 g mL 和0 073 3 398 g mL 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 優(yōu) 于 相 對(duì) 治 療 防 效 240g a i hm 2 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 可 達(dá) 85 64 240g a i hm 2 苯 并 烯 氟 菌 唑 噴 霧 處 理 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 田 間 相 對(duì) 防 效 均 在75 31 以 上 顯著高于相同劑量的氟吡菌酰胺 氟啶胺和多菌靈的相對(duì)防效 總之 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖?有較高毒力 對(duì)辣椒炭疽病有穩(wěn)定的田間防效 有開發(fā)為防治辣椒炭疽病新藥劑的潛力 關(guān)鍵詞 尖孢炭疽菌 苯并烯氟菌唑 毒力 炭疽病 防效 InhibitoryactivityofbenzovindiflupyragainstfruitrotpathogenColletotrichum acutatumanditscontrolefficacytopepperanthracnose Wang Aiping 1 Xi Shuwen 1 Zhang Guofu 2 Ding Shaowu 3 He Lifei 1 Mu Wei 1 Liu Feng 1 1 ShandongKeyLaboratoryofPesticideToxicology2 ShandongProvinceInstitutefortheControlof Agrochemicals Jinan250000 ShandongProvince China 3 JinanTianbangChemicalCo Ltd Jinan250000 ShandongProvince China Abstract Inordertoevaluatetheapplicationpotentialofbenzovindiflupyrinthecontroloftheanthrac nose in pepper caused by fungal pathogen Colletotrichum acutatum the sensitivity to benzovindiflupyr of 108 C acutatum isolates from different regions of Shandong Province was determined with mycelial growthandsporegerminationtest therelativeprotectiveactivityandrelativecurativeactivityofbenzo vindiflupyr against pepper anthracnose were evaluated through pepper fruit inoculation test and the relative control effects in laboratory and field test of benzovindiflupyr on pepper anthracnose were veri fied The results showed that benzovindiflupyr had higher inhibitory activity against the conidial germi nation of C acutatum than that against the mycelial growth with EC 50 value ranged from 0 005 g mL to 0 196 g mLand from 0 073 g mLto 3 398 g mL respectively Benzovindiflupyr at the dosage of 240 g a i hm 2 provided relative protective effect of 85 64 which was higher than the relative cura tiveactivity Therelativecontrolefficacyofbenzovindiflupyrat240g a i hm 2 againstpepperanthrac nose was above 75 31 in the field test which was significantly higher than that of fluopyram fluazi nam and carbendazim applied under the same concentration Taken together benzovindiflupyr had high activity against C acutatumand stable field efficacy for pepper anthrancnose thus it could be used as analternativefungicidewithhighpotential Keywords Colletotrichumacutatum benzovindiflupyr inhibitoryactivity anthracnose controlefficacy 我 國(guó) 是 世 界 上 辣 椒 第 二 生 產(chǎn) 國(guó) 和 出 口 國(guó) 其 中 山 東 省 作 為 我 國(guó) 辣 椒 主 要 產(chǎn) 地 之 一 約 占 全 國(guó) 產(chǎn) 量 的10 王 少 立 等 2017 隨 著 市 場(chǎng) 對(duì) 辣 椒 需 求 量 增加 辣椒種植規(guī)模不斷擴(kuò)大 而隨著多年集中栽培 和 氣 候 變 化 病 害 逐 年 增 加 辣 椒 炭 疽 病 是 由 半 知 菌 亞 門 炭 疽 菌 屬 Colletotrichum spp 鄒 學(xué) 校 等 2020 引起的世界性真菌病害 主要在露地辣椒生長(zhǎng) 的中后期發(fā)生 主要危害辣椒和葉片 特別是成熟期 辣 椒 高 楊 楊 等 2017a 每 年7 9 月 山 東 省 辣 椒 正 值 結(jié) 果 期 高 溫 多 雨 的 氣 候 條 件 加 重 辣 椒 炭 疽 病 的 發(fā) 生 和 流 行 減 產(chǎn) 率 達(dá)50 Gao et al 2021 嚴(yán) 重威脅辣椒產(chǎn)業(yè)的發(fā)展 化學(xué)藥劑是仍防治辣椒炭 疽 病 最 有 效 的 方 法 之 一 然 而 在 實(shí) 際 生 產(chǎn) 中 多 菌 靈 百菌清 代森錳鋅和咪鮮胺等登記藥劑對(duì)炭疽病 的防效下降 夏花等 2012 其中炭疽病主要病原菌 膠 孢 炭 疽 菌C gloeosporioides 已 對(duì) 苯 并 咪 唑 類 殺 菌 劑產(chǎn)生抗性 鄧維萍等 2013 因此 尋找活性更高 的替代殺菌劑迫在眉睫 第3 代 新 型 琥 珀 酸 脫 氫 酶 抑 制 劑 succinate de hydrogenase inhibitor SDHI 類 殺 菌 劑 具 有 活 性 高 抑 菌 譜 廣 的 優(yōu) 點(diǎn) 已 被 廣 泛 用 于 防 治 灰 霉 病 和 白 粉 病 等 真 菌 病 害 Ishiietal 2016 研 究 發(fā) 現(xiàn) 各 種 新 型 SDHI 類 殺 菌 劑 對(duì) 炭 疽 菌 的 抑 制 活 性 差 異 明 顯 除 苯 并 烯 氟 菌 唑 外 其 他SDHI 類 殺 菌 劑 對(duì) 炭 疽 菌 的 抑 制 活 性 較 低 苯 并 烯 氟 菌 唑 是 由 先 正 達(dá) 公 司 于 2012 年 開 發(fā) 的 一 種SDHI 類 殺 菌 劑 Mello et al 2021 其 作 用 于 病 原 菌 線 粒 體 呼 吸 鏈 復(fù) 合 物 通 過 影 響 電 子 傳 遞 來 阻 礙 能 量 代 謝 進(jìn) 而 發(fā) 揮 抑 菌 作 用 Hagerty et al 2021 Samaras et al 2021 目 前 該 藥 已 在 巴 西 法 國(guó) 和 巴 拉 圭 等 國(guó) 家 登 記 用 于 防 治 大 豆 銹 病 和 小 麥 葉 枯 病 等 作 物 病 害 Mello et al 2021 據(jù) 報(bào) 道 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 灰 霉 病 He et al 2018 菌 核 病 Huangetal 2019 白 粉 病 及 葉 銹 病 杜慶志等 2020 均有較好的防效和應(yīng)用潛力 被認(rèn) 為 是SDHI 類 殺 菌 劑 中 最 具 潛 力 的 品 種 之 一 目 前 未 見 苯 并 烯 氟 菌 唑 防 治 辣 椒 炭 疽 病 的 報(bào) 道 為明確苯并烯氟菌唑?qū)苯诽烤也〔≡囊?制 活 性 2018 2019 年 自 山 東 省 濟(jì) 寧 菏 澤 德 州 和 泰 安4 個(gè) 市 露 天 辣 椒 產(chǎn) 區(qū) 采 集 感 染 辣 椒 炭 疽 病 的 辣 椒 經(jīng) 單 孢 分 離 法 共 分 離 純 化 獲 得108 株 辣 椒 炭 疽 病 病 原 菌 于 室 內(nèi) 測(cè) 定 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 其 菌 絲 生 長(zhǎng) 和 孢 子 萌 發(fā) 的 抑 制 作 用 并 確 定 其 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的 敏 感 基 線 同 時(shí) 測(cè) 定 該 藥 劑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 相 對(duì) 治 療 防 效 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 室 內(nèi) 相 對(duì) 防 效 及 田 間 相 對(duì) 防 效 以 期 為 該 藥 劑 的 進(jìn) 一 步 推 廣 應(yīng) 用 提 供 依 據(jù) 1 材料與方法 1 1 材料 供 試 菌 株 植 物 和 土 壤 2018 2019 年 自 山 東 省濟(jì)寧 菏澤 德州和泰安市露地辣椒主產(chǎn)區(qū)采集感 染 辣 椒 炭 疽 病 的 辣 椒 病 果 采 用 單 孢 分 離 法 對(duì) 其 進(jìn) 行 分 離 純 化 Shastrietal 2020 共 得 到108 株 辣 椒 炭 疽 病 菌 其 中 濟(jì) 寧 市 獲 得30 株 菌 株 編 號(hào) 分 別 為 濟(jì) 寧1 濟(jì) 寧30 菏 澤 市 獲 得25 株 菌 株 編 號(hào) 分 別 為 菏 澤1 菏 澤25 泰 安 市 獲 得25 株 菌 株 編 號(hào) 分 別 為 泰 安1 泰 安25 德 州 市 獲 得28 株 菌 株 編 號(hào) 分 別 為 德 州1 德 州28 通 過 形 態(tài) 學(xué) 特 征 和 分 子 生 物 學(xué) 特 征 將108 株 菌 株 均 鑒 定 為 尖 孢 炭 疽 菌C acutatum 高 楊 楊 等 2017b 將 其 接 種 于 馬 鈴 薯 葡 萄 糖 瓊 脂 potatodextroseagar PDA 培 養(yǎng) 基 斜 面 上 于4 保 存?zhèn)溆?保護(hù)和治療試驗(yàn)中辣椒品種為朝天椒天宇 3 號(hào) 種 子 購(gòu) 于 純 豐 種 業(yè) 有 限 公 司 露 天 種 植 于 山 東 農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)基地 選擇同一時(shí)期 大小一致且未噴 施 過 藥 劑 的 辣 椒 行 試 驗(yàn) 室 內(nèi) 防 效 試 驗(yàn) 所 用 品 種 為 線 椒6 號(hào) 由山東省 德州市超 豐種業(yè)提 供 于室內(nèi)種 植 常 規(guī) 管 理 至 成 株 期 時(shí) 供 試 室 內(nèi) 防 效 試 驗(yàn) 中 黃 壤 土 由 山 東 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 試 驗(yàn) 基 地 提 供 基 質(zhì) 土 和 有 機(jī) 質(zhì) 購(gòu)自新洋豐農(nóng)業(yè)科技股份有限公司 培 養(yǎng) 基 PDA 培 養(yǎng) 基 成 分 為 馬 鈴 薯200 g 葡 萄 糖20 g 瓊 脂 粉20 g 去 離 子 水1 L 水 瓊 脂 water agar WA 培 養(yǎng) 基 成 分 為 葡 萄 糖20 g 瓊 脂 粉20 g 去離子水1L 藥 劑 96 苯 并 烯 氟 菌 唑 benzovindiflupyr 原 藥 150 g L 苯 并 烯 氟 菌 唑 乳 油 先 正 達(dá) 南 通 作 物 保 3 期 王愛萍等 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖亩玖皩?duì)其所致辣椒炭疽病的防效 831護(hù) 有 限 公 司 41 7 氟 吡 菌 酰 胺 fluopyram 懸 浮 劑 拜 耳 股 份 有 限 公 司 500g L 氟 啶 胺 fluazinam 懸 浮 劑 江 陰 蘇 利 化 學(xué) 股 份 有 限 公 司 50 多 菌 靈 car bendazim 可濕性粉劑 上海悅聯(lián)化工有限公司 試 劑 及 儀 器 二 甲 基 亞 砜 dimethyl sulfoxide DMSO 天 津 市 津 東 天 正 精 細(xì) 化 學(xué) 試 劑 廠 其 他 試 劑 均 為 國(guó) 產(chǎn) 分 析 純 Olympus IX 71 光 學(xué) 電 子 顯 微 鏡 日 本 奧 林 巴 斯 公 司 手 持 噴 霧 器K901 輝 虹 科 技 有 限 公 司 SPX 型 智 能 生 化 培 養(yǎng) 箱 寧 波 江 南 儀 器 廠 WS 16 農(nóng) 用 背 負(fù) 式 噴 霧 器 山 東 衛(wèi) 士 植 保 機(jī) 械 有 限公司 1 2 方法 1 2 1 苯并烯氟菌唑?qū)z生長(zhǎng)的抑制作用 采 用 菌 絲 生 長(zhǎng) 速 率 法 Forcelini et al 2016 測(cè) 定 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì)108 株 尖 孢 炭 疽 菌 菌 株 菌 絲 生 長(zhǎng) 的 抑 制 活 性 用DMSO 將96 苯 并 烯 氟 菌 唑 原 藥 溶 解 配 制 成 濃 度 為600 g mL 的 母 液 用 含0 1 吐 溫 80 的 滅 菌 去 離 子 水 將 其 稀 釋 成 系 列 濃 度 為 0 5 1 5 10 和50 g mL 的 藥 液 與 加 熱 后 冷 卻 至 50 左 右 的PDA 培 養(yǎng) 基 混 合 制 成 含 苯 并 烯 氟 菌 唑 的PDA 平 板 含 苯 并 烯 氟 菌 唑 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 0 05 0 1 0 5 1 和5 g mL 用 直 徑 為8 mm 的 打 孔 器在培養(yǎng)7d 后的供試菌株菌落邊緣打取菌餅 將其 接 種 到 含 藥PDA 平 板 中 央 以 加 入 等 體 積DMSO 為 溶劑對(duì)照 以加入滅菌去離子水為空白對(duì)照 每個(gè)處 理重復(fù)3 次 接種后置于25 黑暗培養(yǎng)6d 采用十 字 交 叉 法 測(cè) 量 菌 落 直 徑 計(jì) 算 菌 絲 生 長(zhǎng) 抑 制 率 根 據(jù)藥劑濃度對(duì)數(shù)值與菌絲生長(zhǎng)抑制率之間的關(guān)系計(jì) 算 有 效 抑 制 中 濃 度EC 50 菌 絲 生 長(zhǎng) 抑 制 率 溶 劑 對(duì) 照 組 菌 落 直 徑 處 理 組 菌 落 直 徑 對(duì) 照 組 菌 落 直 徑 8 100 1 2 2 苯并烯氟菌唑?qū)︽咦用劝l(fā)的抑制作用 采 用 孢 子 萌 發(fā) 法 Amiri et al 2013 測(cè) 定 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì)108 株 尖 孢 炭 疽 菌 菌 株 分 生 孢 子 萌 發(fā) 的 抑 制 活 性 將 供 試 菌 株 置 于 生 化 培 養(yǎng) 箱 中25 黑 暗 培 養(yǎng)7 d 用 滅 菌 去 離 子 水 洗 下 孢 子 雙 層 紗 布 過 濾去除菌絲 用振蕩器充分搖勻后獲得孢子懸浮液 在 顯 微 鏡 下 調(diào) 節(jié) 孢 子 濃 度 至1 10 5 個(gè) L 按 照 含 苯 并 烯 氟 菌 唑 的PDA 平 板 方 法 配 制 含 苯 并 烯 氟 菌 唑 的WA 平 板 含 苯 并 烯 氟 菌 唑 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 0 012 0 024 0 048 0 096 和0 192 g mL 以 加 入 等 體 積DMSO 為 溶 劑 對(duì) 照 以 加 入 滅 菌 去 離 子 水 為 空 白 對(duì) 照 每 個(gè) 處 理 重 復(fù)3 次 取60 L 孢 子 懸 浮 液 均 勻 涂 布 于WA 平 板 上 置 于 生 化 培 養(yǎng) 箱 中25 黑 暗 培 養(yǎng)8h 于 顯 微 鏡 下 觀 察 分 生 孢 子 萌 發(fā) 情 況 每 個(gè) 平 板 隨 機(jī) 調(diào) 查3 個(gè) 視 野 3 個(gè) 視 野 共 觀 察 分 生 孢 子 數(shù) 不 少 于120 個(gè) 統(tǒng) 計(jì) 孢 子 總 數(shù) 及 孢 子 萌 發(fā) 數(shù) 計(jì) 算 孢 子萌發(fā)抑制率 根據(jù)藥劑濃度對(duì)數(shù)值與孢子萌發(fā)抑 制 率 之 間 的 關(guān) 系 計(jì) 算 有 效 抑 制 中 濃 度EC 50 孢 子 萌 發(fā) 抑 制 率 溶 劑 對(duì) 照 組 孢 子 萌 發(fā) 率 處 理 組 孢 子 萌 發(fā)率 溶劑對(duì)照組孢子萌發(fā)率 100 1 2 3 尖孢炭疽菌對(duì)苯并烯氟菌唑的敏感基線 參照姚錦愛等 2022 方法建立敏感基線 將供 試 菌 株 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的EC 50 由 高 到 低 劃 分 成7 個(gè) 區(qū) 間 組 距 為EC 50 最 大 值 與EC 50 最 小 值 的 差 值 除 以 7 統(tǒng) 計(jì) 不 同 區(qū) 間 各 菌 株EC 50 的 出 現(xiàn) 頻 率 繪 制 尖 孢 炭 疽 病 菌 菌 株 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的 敏 感 性 頻 率 分 布 圖 采 用SAS9 3 軟 件 對(duì) 其 分 布 進(jìn) 行Shapiro Wilk 正 態(tài)性檢驗(yàn) 當(dāng)供試菌株對(duì)苯并烯氟菌唑的敏感性頻 率 分 布 近 似 呈 正 態(tài) 分 布 時(shí) 其 平 均EC 50 可 作 為 尖 孢 炭疽菌對(duì)該藥劑的敏感基線 1 2 4 苯并烯氟菌唑的保護(hù)防效和治療防效 傳 統(tǒng) 藥 劑 多 菌 靈 殺 菌 譜 廣 對(duì) 多 種 作 物 上 由 真 菌引起的病害均有防效 屬于在登藥劑 但由于時(shí)間 跨 度 稍 大 目 前 單 劑 登 記 失 效 現(xiàn) 僅 有 混 劑 在 登 氟 啶胺登記用于防治辣椒炭疽病 效果穩(wěn)定 目前尚未 發(fā) 現(xiàn) 辣 椒 對(duì) 其 產(chǎn) 生 抗 藥 性 氟 啶 胺 登 記 劑 量 為225 262 5 g a i hm 2 氟 吡 菌 酰 胺 同 屬 于SDHI 類 殺 菌 劑 對(duì)多種病原菌有很好的抑制活性 雖未登記用于 防 控 辣 椒 炭 疽 病 但 與 苯 并 烯 氟 菌 唑 同 屬 于SDHI 類藥劑 兩者作用機(jī)理相同 但兩者對(duì)辣椒炭疽病的 防 效 差 異 尚 不 清 楚 因 此 本 研 究 選 擇 多 菌 靈 氟 啶 胺和氟吡菌酰胺為對(duì)照藥劑進(jìn)行試驗(yàn) 參照中國(guó)農(nóng) 藥 信 息 網(wǎng) 上 公 布 的 氟 啶 胺 登 記 劑 量 設(shè) 定 氟 啶 胺 劑 量 為240g a i hm 2 參 照 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 尖 孢 炭 疽 菌 的 毒 力 結(jié) 果 及 對(duì) 照 藥 劑 氟 啶 胺 的 劑 量 設(shè) 定 苯 并 烯 氟 菌 唑 劑 量 分 別 為60 120 和240 g a i hm 2 試 驗(yàn) 共7 個(gè) 處 理 即 劑 量 分 別 為60 120 和240g a i hm 2 的 苯 并 烯 氟 菌 唑 240g a i hm 2 氟 吡 菌 酰 胺 對(duì) 照 藥 劑 240g a i hm 2 氟 啶 胺 對(duì) 照 藥 劑 240g a i hm 2 多菌靈 對(duì)照藥劑 和清水處理 空白對(duì)照 參照金麗華等 2007 方法測(cè)定苯并烯氟菌唑?qū)?辣 椒 炭 疽 病 的 保 護(hù) 防 效 從 未 施 藥 的 朝 天 椒 天 宇3 號(hào) 辣椒植株上摘取大小一致 長(zhǎng)勢(shì)優(yōu)良的辣椒 用無菌 去離子水清洗干凈 在室溫下自然晾干 放到含有浸 濕 濾 紙 的 長(zhǎng)16 cm 寬10 cm 高 6 cm 的 保 鮮 盒 中 選 擇 致 病 力 穩(wěn) 定 的 濟(jì) 寧11 作 為 接 種 菌 株 使 用 手 持 噴 霧 器K901 將 上 述 藥 劑 均 勻 噴 施 到 辣 椒 表 面 形 832 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) 50 卷成 一 層 藥 膜 每 個(gè) 辣 椒 噴 液 量 為15 mL 噴 施24 h 后 用 滅 菌 接 菌 針 在 辣 椒 表 面 刺1 個(gè) 深 度 為1 mm 的 傷 口 取10 L 濃 度 為1 10 5 個(gè) L 的 孢 子 懸 浮 液 滴 到 傷 口 處 將 其 置 于 溫 度25 光 周 期12 L 12 D 相 對(duì) 濕 度85 的 生 化 培 養(yǎng) 箱 中 培 養(yǎng)7 d 測(cè) 量 病 斑 直 徑 每 個(gè) 處 理20 個(gè) 辣 椒 試 驗(yàn) 重 復(fù)3 次 計(jì) 算 各 處 理 的 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 空 白 對(duì) 照 病 斑 直徑 處理病斑直徑 空白對(duì)照病斑直徑 100 參照金麗華等 2007 方法測(cè)定苯并烯氟菌唑?qū)?辣椒炭疽病的相對(duì)治療防效 方法同相對(duì)保護(hù)防效 僅 是 先 接 種 孢 子 懸 浮 液 24 h 后 再 噴 施 藥 液 計(jì) 算 各處理的相對(duì)治療防效 公式同上 1 2 5 苯并烯氟菌唑?qū)苯诽烤也〉氖覂?nèi)防效測(cè)定 采 用 葉 面 噴 霧 法 郭 明 程 等 2013 進(jìn) 行 室 內(nèi) 防 效 測(cè) 定 并 適 當(dāng) 調(diào) 整 2019 年4 月 在 長(zhǎng)5cm 寬5cm 高7cm 的 育 苗 盆 中 播 種 易 感 辣 椒 品 種 線 椒6 號(hào) 土 壤 為 育 苗 基 質(zhì) 土 每 盆 種 植1 株 將 育 苗 盤 置 于 山 東 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 溫 室 內(nèi) 采 用 常 規(guī) 管 理 待 種 子 萌 發(fā) 長(zhǎng) 至2 片 真 葉 后 選 取 長(zhǎng) 勢(shì) 整 齊 一 致 的 植 株 移 栽 至 長(zhǎng)9 cm 寬9cm 高9cm 的 花 盆 中 黃 壤 土 和 有 機(jī) 質(zhì) 按 體 積 比3 1 混 合 作 為 土 壤 每 盆 種 植1 株 培 養(yǎng)12 周 后 待 辣 椒 苗 長(zhǎng) 至 成 株 期 時(shí) 進(jìn) 行 試 驗(yàn) 試 驗(yàn) 共 設(shè)7 個(gè) 處 理 7 個(gè) 處 理 同1 2 4 每 個(gè) 處 理10 株 試 驗(yàn) 重 復(fù)3 次 共210 株 選 擇 對(duì) 試 驗(yàn) 藥 劑 均 表 現(xiàn) 敏 感 的 濟(jì) 寧11 菌 株 作 為 接 種 菌 株 使 用 手 持 噴 霧 器K901 將 濃 度 為 1 10 5 個(gè) L 的 孢 子 懸 浮 液 噴 霧 接 種 到 辣 椒 苗 上 每 株 接 種5mL 將 接 種 后 的 辣 椒 苗 置 于 溫 度 25 2 相 對(duì) 濕 度 95 的 黑 暗 條 件 下 誘 導(dǎo) 發(fā) 病 24h 后 使 用 手 持 噴 霧 器K901 將 不 同 處 理 的 藥 劑 噴 灑 在 辣 椒 苗 上 每 株 噴 施 約25 mL 噴 霧 量 以 葉 片 滴 水 為 準(zhǔn) 施 藥7d 后 對(duì) 辣 椒 苗 的 發(fā) 病 情 況 進(jìn) 行 調(diào) 查 參 照 農(nóng) 藥 田 間 藥 效 試 驗(yàn) 準(zhǔn) 則 一 殺 菌 劑 防 治 辣 椒 炭 疽 病 GB T17980 33 2000 對(duì) 發(fā) 病 情 況 進(jìn) 行 分 級(jí) 計(jì) 算 各 處 理 的 病 情 指 數(shù) 和 相 對(duì) 防 效 病 情 指 數(shù) 100 各 級(jí) 病 葉 數(shù) 相 對(duì) 級(jí) 數(shù) 值 調(diào) 查 總 葉 數(shù) 9 相 對(duì) 防 效 100 對(duì) 照 病 情 指 數(shù) 處 理 病 情 指 數(shù) 對(duì) 照 病情指數(shù) 1 2 6 苯并烯氟菌唑?qū)苯诽烤也〉奶镩g防效測(cè)定 根 據(jù) 農(nóng) 藥 田 間 藥 效 試 驗(yàn) 準(zhǔn) 則 一 殺 菌 劑 防 治 辣 椒 炭 疽 病 GB T17980 33 2000 標(biāo) 準(zhǔn) 于2019 年 7 月 分 別 在 山 東 省 濟(jì) 寧 市 金 鄉(xiāng) 縣 魚 山 鎮(zhèn) 北 李 村 和 山 東 省 泰 安 市 岱 岳 區(qū) 大 汶 口 鎮(zhèn) 東 大 吳 村 進(jìn) 行 田 間 試 驗(yàn) 試 驗(yàn) 地 每 年 自 然 發(fā) 生 辣 椒 炭 疽 病 且 未 使 用 過 供 試 藥 劑 當(dāng) 年3 月 種 植 線 椒6 號(hào) 試 驗(yàn) 共 設(shè)7 個(gè) 處 理 處 理 同1 2 4 試 驗(yàn) 采 用 完 全 隨 機(jī) 區(qū) 組 設(shè) 計(jì) 每 個(gè) 處 理3 個(gè) 小 區(qū) 即3 個(gè) 重 復(fù) 每 個(gè) 小 區(qū) 面 積30m 2 小 區(qū) 之 間 設(shè) 置50cm 保 護(hù) 行 于 發(fā) 病 初 期 開 始 第1 次 用 藥 濟(jì) 寧 市 和 泰 安 市 的 施 藥 時(shí) 間 分 別 是7 月10 日 和7 月12 日 此 時(shí) 辣 椒 正 值 結(jié) 果 期 使 用WS 16 農(nóng) 用 背 負(fù) 式 噴 霧 器 對(duì) 辣 椒 全 株 均 勻 噴 藥 藥 液 量 為 600 L hm 2 以 藥 液 在 辣 椒 上 呈 現(xiàn) 露 水 狀 為 宜 14 d 后 進(jìn) 行 第2 次 用 藥 分 別 在 施 藥 前 和 末 次 施 藥 后 14d 調(diào) 查 辣 椒 病 斑 面 積 每 小 區(qū) 隨 機(jī) 取5 個(gè) 樣 點(diǎn) 每 點(diǎn) 調(diào) 查2 株 共 計(jì)10 株 每 株 調(diào) 查 全 部 辣 椒 根 據(jù) 病 斑 面 積 按 照 上 述 標(biāo) 準(zhǔn) 進(jìn) 行 病 情 分 級(jí) 計(jì) 算 病 情 指 數(shù) 和相對(duì)防效 方法同1 2 6 1 3 數(shù)據(jù)分析 采 用SPSS16 0 軟 件 對(duì) 數(shù) 據(jù) 進(jìn) 行 統(tǒng) 計(jì) 分 析 應(yīng) 用 Tukey 法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn) 2 結(jié)果與分析 2 1 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖囊种谱饔?苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖z生長(zhǎng)和孢子萌 發(fā) 均 有 較 強(qiáng) 的 抑 制 作 用 隨 著 苯 并 烯 氟 菌 唑 濃 度 的 升 高 抑 制 率 顯 著 增 加 P 0 05 圖1 濃 度 為5 g mL 的 苯 并 烯 氟 菌 唑 處 理 后 尖 孢 炭 疽 菌 菌 絲 生 長(zhǎng) 抑 制 率 達(dá) 到 最 高 為90 41 以 上 圖1 A 菌 絲 末 端 扭 曲 分 枝 較 對(duì) 照 菌 絲 增 多 圖2 A B 濃 度 為0 192 g mL 的 苯 并 烯 氟 菌 唑 處 理 后 98 67 尖 孢 炭 疽 菌 菌 株 的 孢 子 萌 發(fā) 受 到 抑 制 圖1 B 1 33 尖 孢 炭 疽 菌 菌 株 的 孢 子 萌 發(fā) 但 萌 發(fā) 后 的 芽 管 膨 大 變 粗 且 生 長(zhǎng) 受 到 抑制 芽管長(zhǎng)度明顯短于對(duì)照處理 圖2 C D 2 2 不同種群對(duì)苯并烯氟菌唑的敏感性差異 山 東 省4 個(gè) 尖 孢 炭 疽 菌 種 群 菌 絲 生 長(zhǎng) 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 均 表 現(xiàn) 為 敏 感 但4 個(gè) 種 群 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的 敏 感 性 之 間 存 在 差 異 其 中 泰 安 市 尖 孢 炭 疽 菌 種 群 的 敏 感 性 最 低 EC 50 為1 116 g mL 但 與 菏 澤 市 尖 孢 炭 疽 菌 種 群 的 敏 感 性 差 異 不 顯 著 濟(jì) 寧 市 和 德 州 市 尖 孢 炭 疽 菌 種 群 的 敏 感 性 較 高 EC 50 分 別 為 0 589 g mL 和0 641 g mL 顯 著 低 于 其 他2 個(gè) 種 群 P 0 05 表1 盡 管 不 同 種 群 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的 敏 感 性 存 在 差 異 但 未 見 敏 感 性 明 顯 下 降 的 菌 株 濟(jì) 寧 菏澤 泰安和德州市尖孢炭疽菌種群孢子萌發(fā)對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的 敏 感 性 無 顯 著 差 異 EC 50 分 別 為 0 048 0 048 0 052 和0 042 g mL 表 明 苯 并 烯 氟 菌 唑?qū)怄咛烤揖咦用劝l(fā)的抑制活性與地理來源無 關(guān) 表1 3 期 王愛萍等 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖亩玖皩?duì)其所致辣椒炭疽病的防效 833圖1 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖z生長(zhǎng) A 及孢子萌發(fā) B 的抑制率 Fig 1 Inhibitionrateofmycelialgrowth A andsporegermination B ofColletotrichumacutatumbybenzovindiflupyr 圖 中 數(shù) 據(jù) 為 平 均 數(shù) 標(biāo) 準(zhǔn) 誤 不 同 小 寫 字 母 表 示 經(jīng)Tukey 法 檢 驗(yàn) 差 異 顯 著 P 0 05 Dataaremean SE Differentlower caselettersindicatesignificantdifferencebyTukeytest P 0 05 A 對(duì) 照 處 理 的 菌 絲 B 濃 度 為5 g mL 苯 并 烯 氟 菌 唑 處 理7 d 的 菌 絲 C 對(duì) 照 處 理 的 分 生 孢 子 D 濃 度 為 0 192 g mL 苯 并 烯 氟 菌 唑 處 理8h 的 分 生 孢 子 A MyceliauntreatedwithCK B myceliatreatedwith5 g mLben zovindiflupyrfor7d C conidiauntreatedwithCK D conidiatreatedwith0 192 g mLbenzovindiflupyrfor8h 圖2 苯并烯氟菌唑?qū)怄咛烤揖z形態(tài)和孢子萌發(fā)的影響 Fig 2 EffectsofbenzovindiflupyronthemycelialmorphologyandsporegerminationofColletotrichumacutatum 表1 苯并烯氟菌唑?qū)ι綎|省4 個(gè)市分離的尖孢炭疽菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制活性 Table1 Inhibitoryactivitiesofbenzovindiflupyragainstmycelialgrowthandsporegerminationof ColletotrichumacutatumisolatedfromfourcitiesinShandongProvince 采集地點(diǎn) Collectionsite 濟(jì)寧市JiningCity 菏澤市HezeCity 泰安市Tai anCity 德州市DezhouCity 菌株數(shù) No of strains 30 25 25 28 菌絲生長(zhǎng)Mycelialgrowth EC 50 范圍 RangeofEC 50 g mL 0 084 1 317 0 196 3 150 0 133 3 976 0 073 3 398 EC 50 平均數(shù) MeanofEC 50 g mL 0 589 0 058b 0 827 0 113ab 1 116 0 199a 0 641 0 119b 孢子萌發(fā)Sporegermination EC 50 范圍 RangeofEC 50 g mL 0 005 0 140 0 017 0 140 0 005 0 196 0 005 0 081 EC 50 平均數(shù) MeanofEC 50 g mL 0 048 0 005a 0 048 0 006a 0 052 0 008a 0 042 0 004a 表 中 數(shù) 據(jù) 為 平 均 數(shù) 標(biāo) 準(zhǔn) 誤 同 列 不 同 小 寫 字 母 表 示 經(jīng)Tukey 法 檢 驗(yàn) 差 異 顯 著 P 0 05 Dataaremean SE Differentlet tersinthesamecolumnindicatesignificantdifferencebyTukeytest P0 050 圖3 A 因 此 0 780 g mL 可 作 為 尖 孢 炭 疽 菌 菌 絲 生長(zhǎng)對(duì)苯并烯氟菌唑的敏感基線用于抗性監(jiān)測(cè) 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì)108 株 尖 孢 炭 疽 菌 菌 株 孢 子 萌 發(fā) 的 EC 50 介 于 0 005 0 196 g mL 之 間 平 均 EC 50 為 0 048 g mL 且108 株 尖 孢 炭 疽 菌 菌 株 孢 子 萌 發(fā) 對(duì) 苯 并 烯 氟 菌 唑 的 敏 感 性 頻 率 呈 單 峰 曲 線 分 布 經(jīng) Shapiro Wilk 法 分 析 符 合 正 態(tài) 分 布 P 0 280 0 050 圖3 B 因 此 0 048 g mL 可 以 作 為 尖 孢 炭 疽 菌 孢 子萌發(fā)對(duì)苯并烯氟菌唑的敏感基線用于抗性監(jiān)測(cè) 2 4 苯并烯氟菌唑的保護(hù)防效和治療防效 隨 著 劑 量 增 加 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 相 對(duì) 保 護(hù) 防 效 和 相 對(duì) 治 療 防 效 均 顯 著 上 升 相 對(duì) 保 834 植 物 保 護(hù) 學(xué) 報(bào) 50 卷護(hù) 防 效 分 別 為53 32 64 99 和85 64 相 對(duì) 治 療 防 效 分 別 為43 76 51 60 和74 96 且 同 劑 量 下 相對(duì)保護(hù)防效均高于相對(duì)治療防效 其中劑量為 240 g a i hm 2 苯 并 烯 氟 菌 唑 對(duì) 辣 椒 炭 疽 病 的 保 護(hù) 作用及治療作用分別顯著優(yōu)于對(duì)照藥劑氟吡菌酰胺 的 保 護(hù) 作 用 和 治 療 作 用 P 0 05 也 分 別 優(yōu) 于 對(duì) 照 藥 劑 氟 啶 胺 和 多 菌 靈 的 保 護(hù) 作 用 和 治 療 作 用 但 差 異不顯著 表2 圖3 尖孢炭疽菌菌絲生長(zhǎng) A 及孢子萌發(fā) B 對(duì)苯并烯氟菌唑的敏感性頻率分布 Fig 3 Distributionofsensitivityfrequencyofmycelialgrowthassay A andsporegermination B of Colletotrichumacutatumtobenzovindiflupyr 表2 不同藥劑對(duì)辣椒炭疽病的相對(duì)保護(hù)防效和相對(duì)治療防效 Table2 Relativeprotectiveandcurativeactivitiesoffungicidesagainstpepperanthracnose 處理 Treatment 苯并烯氟菌 Benzovindiflupyr 氟吡菌酰胺Fluopyram 氟啶胺Fluazinam 多菌靈Carbendazim 對(duì)照CK 劑量 Dose g a i hm 2 60 120 240 240 240 240 保護(hù)作用Protectiveeffect 病斑直徑 Lesiondiameter mm 8 67 2 08b 6 50 2 18bc 2 67 1 53d 8 77 0 91b 4 63 0 58cd 5 33 0 58bcd 18 57 0 68a 相對(duì)防效 Relativeefficacy 53 32 3 47b 64 99 3 78ab 85 64 4 75a 52 78 2 82b 75 04 1 80a 71 27 1 80ab 治療作用Curativeeffect 病斑直徑 Lesiondiameter mm 10 70 0 91b 9 33 0 73bc 5 67 0 41c 10 20 1 30b 7 20 0 62bc 7 17 1 17bc 19 23 0 23a 相對(duì)防效 Relativeefficacy 43 76 4 58b 51 60 3 76b 74 96 2 67a 46 97 6 76b 64 23 3 27ab 64 40 6 06ab 表 中 數(shù) 據(jù) 為 平 均 數(shù) 標(biāo) 準(zhǔn) 誤 同 列 不 同 小 寫 字 母 表 示 經(jīng)Tukey 法 檢 驗(yàn) 差 異 顯 著 P 0 05 Data are mean SE Different lowercas