NY T 4489-2025 甜瓜品種鑒定SSR分子標(biāo)記法.pdf

2025 01 09 發(fā)布 2025 05 01 實(shí)施 甜瓜品種鑒定 SSR分子標(biāo)記法 05 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 備案號(hào) XXXX XXXX 65 020 01 CCS B 4489 2025 Identification of melonvarieties SSR marker method 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 發(fā)布 NY T 目 次 前言 范圍 規(guī)范性引用文件 術(shù)語(yǔ)和定義 縮略語(yǔ) 原理 主要儀器設(shè)備及試劑 溶液配制 引物信息及使用 參照品種及使用 操作程序 結(jié)果判定與表述 附錄A 規(guī)范性 主要儀器設(shè)備及試劑 附錄B 規(guī)范性 溶液配制 附錄C 規(guī)范性 引物及序列 附錄D 資料性 引物相關(guān)信息 附錄E 資料性 參照品種相關(guān)信息 附錄F 資料性 引物分組 NY T 前 言 本文件按照GB T 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 部分 標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則 的規(guī)定起 草 請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利 本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任 本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司提出 本文件由全國(guó)植物新品種測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì) SAC TC 歸口 本文件起草單位 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)作物品種資源研究所 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈密瓜中心 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 科技發(fā)展中心 本文件主要起草人 顏國(guó)榮 韓瑞璽 鄧超宏 楊永 王威 徐麟 劉寧 宋羽 王帆 趙連佳 張永兵 肖 菁 阿布都克尤木 阿不都熱孜克 李嬡嬡 楊巖巖 何姝燃 NY T 甜瓜品種鑒定 SSR分子標(biāo)記法 范圍 本文件規(guī)定了利用簡(jiǎn)單重復(fù)序列 SSR 標(biāo)記進(jìn)行甜瓜 CucumismeloL 品種鑒定的術(shù)語(yǔ)和定義 縮略 語(yǔ) 原理 主要儀器設(shè)備及試劑 溶液配制 引物信息及使用 參照品種及使用 操作程序 結(jié)果判定與表述 本文件適用于甜瓜品種的DNA分子數(shù)據(jù)采集和品種鑒定 規(guī)范性引用文件 下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款 其中 注日期的引用文件 僅 該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件 不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改單 適用于本文件 GB T 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 扦樣 GB T 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 NY T 植物品種鑒定DNA分子標(biāo)記法 總則 術(shù)語(yǔ)和定義 NY T 界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件 縮略語(yǔ) 下列縮略語(yǔ)適用于本文件 APS 過(guò)硫酸銨 ammoniumpersulphate bp 堿基對(duì) basepair CTAB 十六烷基三甲基溴化銨 cetyltrimethylammoniumbromide DNA 脫氧核糖核酸 deoxyribonucleicacid dNTPs 脫氧核糖核苷三磷酸 deoxy ribonucleosidetriphosphates EDTA 乙二胺四乙酸 ethylenediaminetetraaceticacid PAGE 聚丙烯酰胺凝膠電泳 polyacrylamidegelelectrophoresis PCR 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) polymerasechainreaction SSR 簡(jiǎn)單重復(fù)序列 simplesequencerepeat Taq酶 耐熱DNA聚合酶 Taq DNApolymerase TBE 三羥甲基氨基甲烷硼酸鹽乙二胺四乙酸 Tris borate EDTA TE 三羥甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸 Tris EDTA TEMED 四甲基乙二胺 N N N N tetramethylethylenediamine Tris 三羥甲基氨基甲烷 Tris hydroxymethyl methylaminomethaneTHAM 原理 甜瓜品種基因組中存在著大量能夠穩(wěn)定遺傳的SSR標(biāo)記 不同甜瓜品種在同一SSR的重復(fù)次數(shù)存 在差異 這種差異可通過(guò)PCR擴(kuò)增及電泳方法進(jìn)行檢測(cè) 進(jìn)而區(qū)分不同的品種 主要儀器設(shè)備及試劑 主要儀器設(shè)備及試劑見(jiàn)附錄A 溶液配制 溶液配制方法見(jiàn)附錄B NY T 引物信息及使用 引物及序列見(jiàn)附錄C 引物相關(guān)信息見(jiàn)附錄D 利用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 PAGE 檢測(cè)時(shí)選擇普 通引物 利用熒光毛細(xì)管電泳檢測(cè)時(shí)選擇熒光標(biāo)記引物 熒光標(biāo)記位于正向引物 端 推薦的熒光標(biāo)記見(jiàn) 附錄D 可利用附錄C中的引物序貫檢測(cè) 當(dāng)檢測(cè)到的差異位點(diǎn)數(shù)能判定送檢樣品與對(duì)照樣品不同時(shí) 停 止檢測(cè) 參照品種及使用 參照品種用于輔助確定送檢樣品在某個(gè)位點(diǎn)的等位變異 宜與送檢樣品同時(shí)檢測(cè) 參照品種相關(guān)信息 見(jiàn)附錄E 操作程序 樣品準(zhǔn)備 送檢樣品可為種子 幼苗 葉片等組織或器官 種子樣品需扦樣時(shí) 應(yīng)符合GB T 的規(guī)定 每 份樣品不少于 個(gè)個(gè)體 等量混合分析 必要時(shí)進(jìn)行個(gè)體檢測(cè) DNA提取 取混合樣本約 mg 置于 mL圓底離心管中 經(jīng)液氮冷凍后充分研磨 每管加入 L預(yù)熱到 的CTAB提取液 充分混合 水浴 min min 每隔 min輕緩顛倒混勻一次 每管加入 與CTAB提取液等體積的三氯甲烷和異戊醇混合液 輕緩混勻后靜置 min rpm離心 min 吸取上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中 加入等體積預(yù)冷的異丙醇 輕輕顛倒混勻 放置 min rpm離心 min 棄上清液 用體積分?jǐn)?shù)為 的乙醇溶液洗滌 遍 晾干 加入 L雙蒸水 或TE緩沖液充分溶解 檢測(cè)DNA濃度和質(zhì)量 保存?zhèn)溆?注 以上為推薦的DNA提取方法 DNA質(zhì)量能夠滿足PCR擴(kuò)增要求的其他DNA提取方法均適用于本標(biāo)準(zhǔn) DNA 溶液的紫外吸光度OD 與OD 的比值宜介于 之間 注 三氯甲烷和異戊醇混合液中三氯甲烷與異戊醇的體積比為 PCR擴(kuò)增 反應(yīng)體系 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的總體積和各組分的終濃度參照表 配制 可以依據(jù)試驗(yàn)條件調(diào)整 表 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系 反應(yīng)組分原濃度終濃度推薦體積 L 緩沖液 含MgCl dNTPs mmol L mmol L Taq酶 U L U L 正向引物 mol L mmol L 反向引物 mol L mmol L DNA ng L ng L 雙蒸水 總體積 反應(yīng)程序 推薦反應(yīng)程序 預(yù)變性 min 變性 s 退火 s 延伸 s 共 個(gè)循環(huán) 延伸 min 產(chǎn)物 保存 反應(yīng)程序中各反應(yīng)參數(shù)可根據(jù)PCR擴(kuò)增儀型號(hào) 酶 引物等不同而做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整 NY T PCR產(chǎn)物電泳 垂直板變性PAGE 制膠 用洗滌劑將玻璃板清洗干凈 再用雙蒸水 無(wú)水乙醇依次擦洗 遍 玻璃板干燥后 將 mL親和 硅烷工作液均勻涂在長(zhǎng)玻璃板上 將 mL剝離硅烷工作液均勻涂在帶凹槽的短玻璃板上 操作過(guò)程 中應(yīng)防止兩塊玻璃板互相污染 玻璃板徹底干燥后 將 mm厚的塑料隔條整齊放在長(zhǎng)玻璃板兩側(cè) 蓋 上凹槽短玻璃板 用夾子固定 用水平儀調(diào)平 取 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的PAGE膠溶液 加入 L 四甲基乙二胺 TEMED 和 L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的過(guò)硫酸銨 APS 迅速混勻 將膠灌入玻璃膠室 灌 膠過(guò)程中應(yīng)防止出現(xiàn)氣泡 待膠室灌滿后 在凹槽處將 mm厚鯊魚(yú)齒梳子平齊端向里輕輕插入膠液 約 mm 室溫聚合 h以上 膠聚合后 清理膠板表面溢出的膠液 輕輕拔出梳子 用水洗凈備用 變性 在 LPCR產(chǎn)物中加入 L 加樣緩沖液 混勻 在PCR擴(kuò)增儀上運(yùn)行 變性 min 冷卻 min以上備用 電泳 將膠板安裝于電泳槽上 在電泳正極槽和負(fù)極槽 上槽 各加入 mL的 TBE緩沖液 使其沒(méi)過(guò) 電極線 V恒壓預(yù)電泳 min min 用移液器吹吸加樣槽 清除氣泡和雜質(zhì) 將樣品梳 鯊魚(yú) 齒朝下 插入凝膠 mm mm 每一個(gè)加樣孔點(diǎn)入 L L樣品 除送檢樣品外 還宜同時(shí)加入?yún)?照品種擴(kuò)增產(chǎn)物和合適的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) V恒壓電泳 電泳時(shí)間參考二甲苯青指示帶泳動(dòng)的位 置和擴(kuò)增產(chǎn)物預(yù)期片段大小范圍 見(jiàn)附錄D 加以確定 二甲苯青指示帶在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 PAGE膠電泳 的泳動(dòng)位置與 bp擴(kuò)增產(chǎn)物泳動(dòng)的位置大致相當(dāng) 擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小在 bp bp bp bp范圍的 電泳參考時(shí)間分別為 h h h h 當(dāng)?shù)任蛔儺悏A基對(duì)數(shù) 差異較小時(shí) 可適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間 電泳結(jié)束后關(guān)閉電源 取下玻璃板并輕輕撬開(kāi) 凝膠附著在長(zhǎng)玻璃板上 染色 將附著凝膠的長(zhǎng)玻璃板膠面向上浸入固定液中 輕輕晃動(dòng) min后取出 在雙蒸水中快速漂洗 時(shí)間 不超過(guò) s 將膠板放入染色液中 輕輕晃動(dòng) min min后取出 在雙蒸水中快速漂洗 時(shí)間不超過(guò) s 將膠板放入顯影液中 輕搖晃動(dòng)待條帶清晰后取出 再迅速放入固定液中定影 min取出 在雙蒸水中 漂洗 min 取出膠板 晾干 放在膠片觀察燈上觀察 記錄結(jié)果 拍照保存 注 固定液 染色液 雙蒸水和顯影液的用量 以淹沒(méi)膠面為準(zhǔn) 熒光毛細(xì)管電泳 PCR產(chǎn)物樣品準(zhǔn)備 根據(jù)預(yù)先確定的引物分組 見(jiàn)附錄F 分別取等體積不同熒光標(biāo)記引物的擴(kuò)增產(chǎn)物 混勻稀釋 吸取 L混合液 加入到DNA分析儀配套上樣板中 注 稀釋倍數(shù)通過(guò)熒光毛細(xì)管電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)確定 變性 上樣板各孔分別加入 L分子量?jī)?nèi)標(biāo)和 L去離子甲酰胺 在PCR擴(kuò)增儀上 變性 min 取出后立即置于冰上 冷卻 min以上 瞬時(shí)離心 s后備用 電泳 按照DNA分析儀操作手冊(cè)電泳 并保存電泳原始數(shù)據(jù)文件 數(shù)據(jù)分析 等位變異確定與記錄 每個(gè)SSR位點(diǎn)的等位變異參照擴(kuò)增片段大小確定 見(jiàn)附錄D 對(duì)于變性PAGE 將送檢樣品在某一 位點(diǎn)擴(kuò)增片段的遷移位置與對(duì)應(yīng)的參照品種進(jìn)行比較 確定送檢樣品在該位點(diǎn)的等位變異 對(duì)于熒光毛 NY T 細(xì)管電泳 通過(guò)參照品種消除不同批次或者不同型號(hào)DNA分析儀可能存在的系統(tǒng)誤差 使用片段分析軟 件讀取送檢樣品在該位點(diǎn)的等位變異 純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X X 雜合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X Y 其中X Y分別為該位 點(diǎn)上的兩個(gè)等位變異 小片段數(shù)據(jù)在前 大片段數(shù)據(jù)在后 缺失位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 示例 樣品在某個(gè)位點(diǎn)上僅出現(xiàn)一個(gè)等位變異 為 bp 則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 示例 樣品在某個(gè)位點(diǎn)上有兩個(gè)等位變異 分別為 bp bp 則該位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為 數(shù)據(jù)比對(duì)與差異位點(diǎn)統(tǒng)計(jì) 逐一比對(duì)送檢樣品與對(duì)照樣品每個(gè)位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù) 按照位點(diǎn)相同 位點(diǎn)差異 數(shù)據(jù)缺失 無(wú)法判 定情形 記錄每個(gè)位點(diǎn)的比對(duì)結(jié)果 統(tǒng)計(jì)檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)和差異位點(diǎn)數(shù) 結(jié)果判定與表述 判定規(guī)則 當(dāng)差異位點(diǎn)數(shù)大于 判定為 不同 當(dāng)差異位點(diǎn)數(shù)小于等于 判定為 疑同 結(jié)果表述 送檢樣品與對(duì)照樣品 或?qū)φ諛悠分讣y 采用檢測(cè) 檢 測(cè)位點(diǎn)數(shù)為 差異位點(diǎn)數(shù)為 判定為 NY T 附 錄 A 規(guī)范性 主要儀器設(shè)備及試劑 A 主要儀器設(shè)備 A PCR擴(kuò)增儀 A 高壓電泳儀 最高電壓不低于 V 具有恒電壓 恒電流和恒功率功能 A 垂直電泳槽及配套的制膠附件 A 離心機(jī) A 水平搖床 A 膠片觀察燈 A 電子天平 感量為 g和 g A 微量移液器 規(guī)格分別為 L L L L L 連續(xù)可調(diào) A 磁力攪拌器 A 核酸濃度測(cè)定儀或超微量紫外分光光度計(jì) A 微波爐 A 高壓滅菌鍋 A 酸度計(jì) A 水浴鍋 A 低溫冰箱 A 制冰機(jī) A 凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀 A DNA分析儀 基于毛細(xì)管電泳 有片段分析功能和數(shù)據(jù)分析軟件 最低區(qū)分力 bp A 其他相關(guān)儀器和設(shè)備 A 主要試劑 除非另有說(shuō)明 均使用分析純?cè)噭?A 十六烷基三甲基溴化銨 CTAB C H CH NBr CAS號(hào) A 三氯甲烷 CHCl CAS號(hào) A 異戊醇 C H O CAS號(hào) A 異丙醇 CH CHOH CAS號(hào) A 乙二胺四乙酸二鈉 EDTA Na C H N Na O CAS號(hào) A 三羥甲基氨基甲烷 Tris C H NO CAS號(hào) A 濃鹽酸 HCl CAS號(hào) A 氫氧化鈉 NaOH CAS號(hào) A PCR緩沖液 含Mg mmol L A 種脫氧核糖核苷酸 dATP dTTP dGTP dCTP A SSR引物 A 氯化鈉 NaCl CAS號(hào) NY T A TaqDNA聚合酶 Taq酶 CAS號(hào) A DNAMarker DNA片段分布范圍在 bp bp A 甲酰胺 CH NO CAS號(hào) A 溴酚藍(lán) C H Br O S CAS號(hào) A 二甲苯青 C H N NaO S CAS號(hào) A 甲叉雙丙烯酰胺 H C CHCONH CH CAS號(hào) A 丙烯酰胺 C H NO CAS號(hào) A 硼酸 H BO CAS號(hào) A 尿素 CH N O CAS號(hào) A 親和硅烷 A 二甲基二氯硅烷 C H Cl Si CAS號(hào) A 無(wú)水乙醇 C H O CAS號(hào) A 四甲基乙二胺 TEMED C H N CAS號(hào) A 過(guò)硫酸銨 APS NH S O CAS號(hào) A 冰醋酸 CH COOH CAS號(hào) A 硝酸銀 AgNO CAS號(hào) A 甲醛 HCHO CAS號(hào) A DNA分析儀用丙烯酰胺膠液 A DNA分析儀用分子量?jī)?nèi)標(biāo) A DNA分析儀用電泳緩沖液 A DNA分析儀用光譜校準(zhǔn)基質(zhì) NY T 附 錄 B 規(guī)范性 溶液配制 試劑配制用水應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)GB T 的要求 B DNA提取溶液的配制 B mol LEDTA溶液 稱取 gNa EDTA H O溶于 mL水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加NaOH調(diào)pH至 加水定容 至 mL 高壓滅菌 min B mol LHCl溶液 量取 mL濃鹽酸 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 加水定容至 mL B mol LNaOH溶液 稱取 gNaOH溶于 mL水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加水定容至 mL B mol LTris HCl溶液 稱取 gTris堿溶于 mL水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加HCl調(diào)pH至 加水定容至 mL 高壓滅菌 min B CTAB提取液 稱取 gCTAB gNaCl置于 mL燒杯中 量取 mL mol LTris HCl溶液和 mL mol LEDTA溶液倒入燒杯中 加 mL水 充分?jǐn)嚢枞芙?加水定容至 mL 高壓滅菌 min B TE緩沖液 量取 mL mol LTris HCl溶液和 mL mol LEDTA溶液 加水定容至 mL 高壓 滅菌 min 保存 B PCR擴(kuò)增試劑的配制 B dNTPs溶液 分別配制dATP dTTP dCTP dGTP終濃度為 mmol L的儲(chǔ)存液 各取 L混合 加 L TE緩沖液定容 配制成每種脫氧核糖核苷酸終濃度為 mmol L的工作液 高壓滅菌 min 保存 B SSR引物溶液 開(kāi)蓋前瞬時(shí)離心 s 按照說(shuō)明書(shū)加TE緩沖液 分別配制正向引物和反向引物終濃度為 mol L的儲(chǔ)存液 分別取 L正向引物和反向引物儲(chǔ)存液 加 LTE緩沖液配制成終濃度 mol L的 工作液 B 變性PAGE試劑的配制 B 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的丙烯酰胺溶液 稱取 g丙烯酰胺和 g甲叉雙丙烯酰胺溶于 mL水中 充分?jǐn)嚢枞芙?加水定容至 mL 置于棕色瓶中 儲(chǔ)存 B 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的變性PAGE膠溶液 稱取 g尿素置于 mL燒杯中 加入 mL TBE緩沖液和 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的丙烯酰胺溶液 定容至 mL B 親和硅烷緩沖液 NY T 分別量取 mL無(wú)水乙醇和 L冰醋酸 加水定容至 mL B 親和硅烷工作液 分別量取 mL親和硅烷緩沖液和 L親和硅烷原液 混勻 B 剝離硅烷工作液 分別量取 mL二甲基二氯硅烷和 mL三氯甲烷 混勻 B 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 的APS溶液 稱取 gAPS溶于 mL水中 混勻 于 保存 不超過(guò) 天 B TBE緩沖液 稱取Tris g 硼酸 g 溶于 mL水中 加入 mLEDTA溶液 mol L pH 定 容至 mL B TBE緩沖液 量取 mL TBE緩沖液 加水定容至 mL 混勻 B 加樣緩沖液 分別稱取 g溴酚藍(lán)和 g二甲苯青 加入 mL去離子甲酰胺和 mLEDTA溶液 mol L pH 攪拌溶解 B 銀染溶液的配制 B 固定液 量取 mL冰醋酸 加水定容至 mL B 染色液 稱取 g硝酸銀 加水定容至 mL B 顯影液 稱取 g氫氧化鈉溶于 mL水中 用前加 mL甲醛 NY T 附 錄 C 規(guī)范性 引物及序列 引物及序列見(jiàn)表C 表C 引物及序列 引物編號(hào)引物名稱染色體定位正向引物序列 反向引物序列 ME TGGAATACCATCTTACACCTTTCATCCATAAACATTTCCCCGTT ME GGCCACGTGACCTTATGATTCCTTCATCATTTCCAAGGGA ME TTGGCTCCTCTTAGTGTCCTCATGTCAATGCCTTGTGAAGC ME ATGGGCTTTTGGTGATTGATTTCTTCCCACCAAACCTACG ME ACACACCTAATCTCCCTACCTTCAAAGCCAACCCATATCCCAT ME CCCTCAATTACAAGAAAAGCATTACTGGGTTTTGCCGATTT ME GCGCAAATCAAGGGATTTTAATCCAAGGGAAAATGGGAAC ME GGAGGACGAAAGACCAATGAAACCGCAAATACGAGACCTG ME GACAGTAATCACCTCATCAACGCTCCTCCTTAACTCTATAC ME CCCCAAGATTCGTATTAATCAGATTCTTGAAATGGTGGCG ME GCCTTTTGTGATGCTCCAATAATGACACTGCCCACATTCT ME CCACCAACATAACACACAACAGAGTCTCATTCCTCTCGACG ME GGTCGGTCCCCTATTCTCTTGTGCAAATGCAAGATCGAAG ME CATCTCGAACCTAAGAGCCGGCCCTCCCAAAAATTTCAGT ME ATGGTCTCCCCAACCTATCCGAACAATGCAAGAAAATGGGA ME GCGTTTCCAAACAAACATGAAAATGGCAGAGAGCGAGAAA ME CTCAAACAACGTCAGCTGGTACCCAGAAGTGCTTTTCCCT ME TGAACTGTGCAACCACCTGTAATTCCGTATTCAACTCTCC ME ATGATTGGAAGCCACCAAAGTTGAGCCCCAAAATAAATGG ME CGACCGCCATTAATCAAAACTCTCCTGCATAAACCCCAAG ME GGGAATGTAAATTGGATATGGCATTATTACCCATGTACGAG ME TGGTAGTAGAGATGATATACTCAATCTCCGGTTCCAACTC ME AAACAAACATGGAAATAGCTTTCAAGGTTTTTCAATGGAGGGGA ME CTCTCACACTGTTGGGAAGATGTGTATGGAGGGCTTTTCC NY T 附 錄 D 資料性 引物相關(guān)信息 引物相關(guān)信息見(jiàn)表D 表D 引物相關(guān)信息 引物編號(hào)引物名稱熒光標(biāo)記等位變異范圍 bp 主要等位變異 bp 參照品種 ME FAM 卡拉其里甘 八一香梨 PMR ME HEX 白皮脆 安農(nóng) 號(hào) 哈莫尼 白蘭瓜 伯些克辛 光皮勝金白瓜 ME FAM 青皮白肉冬瓜 ME FAM 鐵皮 劈山 卡拉可口奇 金棒子 魯薄二號(hào) ME HEX 景甜 號(hào) 黑眉毛密極甘 哈莫尼 酥皮菜瓜 ME TAMRA 卡拉可口奇 ME ROX 白蘭瓜 阿克可口奇 伯些克辛 ME TAMRA 光皮勝金白瓜 阿克可口奇 伯些克辛 白蘭瓜 ME HEX 酥皮菜瓜 安農(nóng) 號(hào) 哈莫尼 阿克可口奇 白蘭瓜 金棒子 ME HEX 安農(nóng) 號(hào) 哈莫尼 伯些克辛 白皮脆 NY T 表D 續(xù) 引物編號(hào)引物名稱熒光標(biāo)記等位變異范圍 bp 主要等位變異 bp 參照品種 ME ROX 青皮白肉冬瓜 白皮脆 安農(nóng) 號(hào) PMR 酥皮菜瓜 ME FAM 安農(nóng) 號(hào) 酥皮菜瓜 哈莫尼 卡拉其里甘 八一香梨 ME TAMAR 哈莫尼 魯薄二號(hào) 含笑 ME ROX 景甜 號(hào) 白蘭瓜 卡拉可口奇 ME HEX 魯薄二號(hào) 阿克可口奇 八一香梨 卡拉可口奇 白皮脆 ME TAMRA 黑眉毛密極甘 白皮脆 哈莫尼 光皮勝金白瓜 ME TAMRA 景甜 號(hào) 黑眉毛密極甘 鐵皮 金棒子 ME ROX 卡拉其里甘 哈莫尼 光皮勝金白瓜 白蘭瓜 ME FAM 青皮白肉冬瓜 八一香梨 白皮脆 魯薄二號(hào) ME HEX 伯些克辛 光皮勝金白瓜 八一香梨 PMR 酥皮菜瓜 ME FAM 金棒子 光皮勝金白瓜 白蘭瓜 阿克可口奇 NY T 表D 續(xù) 引物編號(hào)引物名稱熒光標(biāo)記等位變異范圍 bp 主要等位變異 bp 參照品種 ME FAM 卡拉可口奇 白蘭瓜 哈莫尼 ME FAM 哈莫尼 安農(nóng) 號(hào) 魯薄二號(hào) 含笑 黑眉毛密極甘 ME ROX 青皮白肉冬瓜 阿克可口奇 景甜 號(hào) 注 附錄D中采用的熒光標(biāo)記僅為示例 采用其他類型熒光標(biāo)記時(shí) 應(yīng)使用參照品種校正數(shù)據(jù) 注 對(duì)于附錄D中未包括的等位變異 應(yīng)按本文件方法 確定其大小和相應(yīng)參照品種 注 附錄D中所列參照品種僅為示例 與參照品種具有相同等位變異的其他品種也可用作該等位變異的參照品種 注 同一名稱不同來(lái)源的參照品種 在某些位點(diǎn)上的等位變異可能不相同 使用前應(yīng)確認(rèn)其等位變異 NY T 附 錄 E 資料性 參照品種相關(guān)信息 參照品種相關(guān)信息見(jiàn)表E 表E 參照品種相關(guān)信息 編號(hào)品種名稱品種來(lái)源編號(hào)品種名稱品種來(lái)源 卡拉其里甘 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 黑眉毛密極甘 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 白皮脆 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 含笑 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 八一香梨 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 安農(nóng) 號(hào) 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 光皮勝金白瓜 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 哈莫尼 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 伯些克辛 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 PMR 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 白蘭瓜 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 酥皮菜瓜 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 金棒子 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 阿克可口奇 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 鐵皮 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 卡拉可口奇 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 魯薄二號(hào) 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 劈山 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 景甜 號(hào) 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 青皮白肉冬瓜 國(guó)家中亞特色作物種質(zhì) 資源中期庫(kù) 烏魯木齊 NY T 附 錄 F 資料性 引物分組 引物分組見(jiàn)表F 表F 引物分組 組別FAM標(biāo)記引物TAMRA標(biāo)記引物ROX標(biāo)記引物HEX標(biāo)記引物 ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME ME 注 括號(hào)內(nèi)是各引物的等位變異范圍 注 同組別內(nèi)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物可以多重電泳 注 可結(jié)合引物等位變異范圍 更換熒光標(biāo)記 調(diào)整分組