保定辣椒炭疽病菌鑒定及對5種藥劑的敏感性.pdf

null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 收稿日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 修訂日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 基金項目 null 河北省現代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項 nullnullnullnullnullnullnullnullnull 武漢市園林植物炭疽病綠色防控技術研究與應用 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 通信作者 null nullnullnullnullnull 張娜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 楊文香 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 為并列第一作者 保定辣椒炭疽病菌鑒定及對 null 種藥劑的敏感性 朱亞楠 null null 王冰雪 null null 戴祎卓 null 楊軍玉 null 胡同樂 null 張 null 娜 null null 楊文香 null 河北農業(yè)大學植物保護學院 河北省農作物病蟲害生物防治技術創(chuàng)新中心 保定 nullnullnullnullnullnullnull 摘要 null 為明確河北省保定市部分縣區(qū)辣椒炭疽病病原菌種類 以望都 順平和安新縣采集的辣椒炭疽病病果為材 料 利用組織分離法獲得炭疽病病原菌nullnull株 通過形態(tài)學和分子生物學鑒定 確定nullnull株為平頭炭疽菌nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null株為斯高威爾炭疽菌nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 分離比例分別為 nullnullnullnullnull和nullnullnullnullnull 采用菌絲生長速率法測定 了null種殺菌劑對nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 和nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull的室內抑菌效果 結果表明 咯菌腈對這null個菌株抑菌效 果最好 nullnull nullnull 分別為nullnullnullnullnull nullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 多菌靈和苯醚甲環(huán)唑對 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull表現較好的抑制效果 nullnullnullnull分 別為nullnullnullnullnull nullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 嘧菌酯和啶酰菌胺抑制效果稍差 多菌靈和苯醚甲環(huán)唑同樣對 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull效果較好 nullnullnullnull分別為nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 嘧菌酯和啶酰菌胺對 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull抑制效果較差 nullnullnullnull 分別為nullnullnullnullnull nullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 本試驗結果明確了保定地區(qū)辣椒炭疽病的病原 為生產中防治由 nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull引起的辣椒炭疽病提供理論依據和用藥參考 關鍵詞 null 辣椒炭疽病 null 病原鑒定 null 殺菌劑 null 室內毒力測定 中圖分類號 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 文獻標識碼 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnullnull null nullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnull 辣椒 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 是我國栽培面積最大的蔬 菜作物 null nullnull 河北省是辣椒生產大省 生產面積已達 null 萬 nullnull null 總產量 nullnullnull 余萬 null 病害的肆虐給辣椒生 產帶來嚴峻的挑戰(zhàn) 據報道 目前對辣椒造成危害的 病原真菌多達 nullnull 種 辣椒炭疽病是世界范圍內辣 椒采前和采后的重要病害 可造成 nullnullnullnullnullnull 的減 nullnullnullnull 產 給辣椒生產造成嚴重的經濟損失 null 辣椒炭疽病的主要癥狀為在病果和病葉表面產 生的凹陷病斑 后期病部產生同心輪紋排列的小黑 點 濕度大時溢出黏液 病原菌不但危害生長期的 辣椒果實和莖葉 而且會導致果實儲存和運輸的過 程中不斷產生腐敗 從而嚴重影響了鮮椒的產量和 品質 引起辣椒炭疽病的病原菌屬于炭疽菌屬 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 常見優(yōu)勢致病種有平頭炭疽菌 nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 斯高威爾炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 以及暹羅炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 等 null 我國已報道的 辣椒炭疽病致病菌至少有 nullnull 種 且不同地區(qū)的優(yōu)勢 種差異較大 null 目前 化學防治是作物炭疽病菌的主要防治手 段 尤其在病害流行時更是不可替代的 周建波 等 null 用 null 種不同作用機制的 nullnull 種藥劑防治辣椒炭 疽病 發(fā)現這些藥劑的田間防效在 nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull 之間 其中 nullnullnull 咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑防 效最高 高楊楊等 null 發(fā)現唑醚菌酯 咯菌腈和啶菌 唑對尖孢炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 引起的辣椒炭疽病具 有較好的預防和治療作用 但化學藥劑的單一使 用和濫用 使得致病菌群對藥劑敏感性下降 防治 效果大打折扣 nullnullnullnullnull 等 null 基于我國 nullnullnull 株平頭 炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 的分析發(fā)現 該菌群體對咪鮮 胺 氟環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑敏感 對戊唑醇和腈菌唑 產生了一定抗藥性 但 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 對 nullnullnull 類殺菌 劑抗性風險較低 評估藥劑對辣椒炭疽病的潛在 應用價值也是對病害進行有效防控的前提 王愛萍 等 null 發(fā)現苯并烯氟菌唑對尖孢炭疽菌有較高毒力 且對辣椒炭疽病田間保護和治療防效達 nullnullnull 以 上 可開發(fā)為防治辣椒炭疽病的新藥劑 目前河北省保定市辣椒炭疽病菌群體種類及對 藥劑敏感性尚無系統(tǒng)的研究 鑒于此 本研究對保 定部分辣椒主要生產縣區(qū)辣椒炭疽病菌進行分離鑒 定 明確致病菌類型 并測定優(yōu)勢致病菌對苯醚甲環(huán) 唑 咯菌腈 多菌靈 嘧菌酯和啶酰菌胺的敏感性 旨 在為河北省保定市辣椒炭疽病防治提供指導 也為 辣椒炭疽病菌對生產中常見藥劑的抗藥性監(jiān)測奠定 基礎 nullnull 材料與方法 nullnullnullnull 供試材料 nullnullnullnull 年從河北保定望都縣 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 順平縣 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 安新縣 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 采集的感染辣椒炭疽病的辣椒果實 nullnullnull 苯醚甲環(huán)唑 nullnullnull 咯菌腈 nullnullnull 多菌靈 nullnullnull 嘧菌酯 nullnullnull 啶酰菌胺 以上原藥均由河北威遠 生物化學有限公司提供 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull 取 nullnullnullnull 去皮切片的新鮮馬鈴薯煮沸并過 濾 加入 nullnullnull 葡萄糖和 nullnullnull 瓊脂 然后定容至 nullnull 分裝三角瓶 nullnullnullnull 高壓滅菌 nullnullnullnullnull 備用 nullnullnullnull 試驗方法 nullnullnullnullnullnull 病原菌的分離 純化 辣椒炭疽病樣品用無菌水清洗后 在超凈工作 臺內用滅菌的剪刀剪取病健交界處的組織塊 nullnullnull nullnullnullnull 大小 用 nullnullnull 乙醇消毒后于次氯酸鈉溶液 中浸泡 nullnullnullnull 最后無菌水漂洗 null 次 將表面水分晾 干后 放入事先準備好的 nullnullnull 平板中 在恒溫培養(yǎng) 箱中 nullnullnull 培養(yǎng) 待組織塊在 nullnullnull 平板上培養(yǎng) null null nullnull 長出菌絲后 挑取邊緣菌絲進一步純化并編號 于 nullnullnull 恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng) nullnullnull 置于 nullnull 冰箱保存 備用 nullnullnullnullnullnull 病原菌形態(tài)學鑒定 選取純化的代表性菌株 nullnullnullnull 和 nullnullnullnull 接種于 nullnullnull 培養(yǎng)基 每個菌株重復 null 次 nullnullnull 黑暗條件下 培養(yǎng) null 后觀察記錄菌落形態(tài) 顏色及孢子形狀等 特征 nullnullnullnullnullnull 分離菌株 nullnullnullnull 和 nullnullnullnull 對辣椒的致病性 測定 nullnull 選取健康無病斑的辣椒果實 用無菌水洗凈后 nullnullnull 乙醇對全果進行表面消毒 并用無菌牙簽在已 消毒部位刺出 nullnullnull 的傷口面 將新鮮的供試菌株 菌餅中有菌絲的一面緊挨著傷口面進行接種 以無 菌的 nullnullnull 培養(yǎng)基塊為對照 在接種處用濕棉球進行 保濕 然后將接種完的材料放入 nullnullnull 恒溫培養(yǎng)箱 中 每天觀察果實的發(fā)病情況 nullnull 后對病斑組織中 的真菌進行再分離培養(yǎng)和鑒定 nullnullnullnullnullnull 病原菌的分子生物學鑒定 將菌株菌 nullnullnullnull 和 nullnullnullnull 分別接種在鋪有滅菌 玻璃紙的 nullnullnull 平板上進行培養(yǎng) nullnull 后收集菌絲 采 用 nullnullnullnull 法提取菌株基因組 nullnullnull 對病原菌的 nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 進行 nullnullnull 擴增 所用 引物見表 null nullnullnull 擴增反應程序設置為 nullnullnull 預變性 nullnullnull nullnull卷第null期 朱亞楠等 保定辣椒炭疽病菌鑒定及對 null種藥劑的敏感性 表null null 用于炭疽病菌多基因聯(lián)合鑒定的引物 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 引物 nullnullnullnullnullnull 序列 nullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 參考文獻 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull 變性 nullnullnullnull nullnullnullnullnull 退火 nullnullnullnullnullnull 根據引 物而定 nullnullnull 延伸 nullnullnullnull nullnull 個循環(huán) 最后 nullnullnull 延伸 nullnullnullnull 擴增產物采用 nullnullnullnull 瓊脂糖凝膠進行電泳檢 測 檢測合格后將擴增產物送上海生工生物工程技 術有限公司進行測序 將測序所得核苷酸序列在 nullnullnullnullnullnullnull 數據庫中進行比對 根據比對結果 參照 nullnullnullnull 等 nullnull 的研究選取相關炭疽菌株基因序列 將 多基因序列首尾相接后 利用 nullnullnullnullnullnullnullnullnull 進行序列 比對 然后用 nullnullnullnullnullnull 軟件構建系統(tǒng)發(fā)育樹 nullnullnullnullnullnull 藥劑室內毒力測定 采用菌絲生長速率法 nullnull 測定藥劑對平頭炭疽 菌 nullnullnullnull 和斯高威爾炭疽菌 nullnullnullnull 的毒力 在對供 試菌株進行活化培養(yǎng) nullnull 之后 在菌落邊緣打取直 徑 nullnullnull 的菌餅 分別接種到含有不同濃度殺菌劑的 nullnullnull 培養(yǎng)基平板的中心位置 每一種殺菌劑都設置了 null 個不同的濃度梯度 表 null 以不含藥 nullnullnull 培養(yǎng)基上 生長的菌落作為空白對照 每處理 null 次重復 將其放 入 nullnullnull 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 在第 null 天時 使用十字交 叉法量取菌落直徑 計算出在不同藥劑濃度下的菌絲 生長抑制率 根據殺菌劑濃度的對數值 null 和抑菌生 長率的幾率值 null 采用 nullnullnull 進行數據處理 獲得抑制 中濃度 nullnullnullnull nullnullnull 置信區(qū)間 nullnullnullnullnullnullnull 等參數 利用 nullnullnullnull 軟件進行卡方檢驗 根據 nullnullnullnull 分析比較不同殺 菌劑對供試病原菌的毒力 進一步通過菌絲生長速 率法測定不同地方分離到的優(yōu)勢致病菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull 對生產中常用藥劑苯醚甲環(huán)唑的敏感性 菌絲生長抑制率 null 對照組菌落直徑 null 處理組 菌落直徑 對照組菌落直徑 nul