鏈格孢菌毒素對(duì)中國(guó)月季主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的影響_李云仙.pdf

第 38 卷 第 3 期 西 南 林 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) Vol38 No32018 年 5 月 JOUNAL OF SOUTHWEST FOESTY UNIVESITY May 2018doi: 10 11929/j issn 20951914 2018 03 015鏈格孢菌毒素對(duì)中國(guó)月季主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的影響李云仙1， 2李永梅3楊發(fā)忠2李 靖4( 1 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院 ， 云南 昆明 650201; 2 西南林業(yè)大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院 ， 云南 昆明 650224;3 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院 ， 云南 昆明 650201; 4 西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 ， 云南 昆明 650224)摘要 : 用鏈格孢菌毒素細(xì)交鏈孢菌酮酸 ( TeA) 處理中國(guó)月季葉片后 ， 用凱氏定氮法 、烘干法 、蒽酮比色法和電感偶合等離子發(fā)射光譜儀 ( ICP-OES) 分別測(cè)定處理 2、6、10、14、20 d 后 ， 處理部位葉片和位于處理葉片上方和下方的葉片中蛋白質(zhì) 、水分 、可溶性糖和礦質(zhì)元素的含量 。結(jié)果表明 : 與健康葉片相比 ， 用 TeA 處理后的葉片其蛋白質(zhì) 、水分和可溶性糖含量均明顯下降 ，蛋白質(zhì)含量變化較復(fù)雜 ， 在處理 6 d 后 ， 其含量顯著增加 ， 之后又隨處理時(shí)間的增加而降低 。蛋白質(zhì)含量從 208. 41 mg/g 降低至 45. 09 mg/g; 水分含量從 77. 36% 下降到 69. 56%， 下降了7. 79%; 可溶性糖含量從 12. 58 mg/g 降低到 8. 45 mg/g。中國(guó)月季用鏈格孢菌毒素 TeA 處理后多種礦質(zhì)元素含量發(fā)生變化 ， Ca、Mg、K、S、P、Zn 等元素含量降低 ， Al、Cu、Mn、Na 等元素含量升高 。并且 TeA 處理具有空間效應(yīng) ， 對(duì)位于處理部位上方和下方的葉片的營(yíng)養(yǎng)元素都有影響 。關(guān)鍵詞 : 中國(guó)月季 ; 鏈格孢菌毒素 ; 水分 ; 蛋白質(zhì) ; 礦質(zhì)元素 ; 可溶性糖中圖分類號(hào) : S68512 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 : A 文章編號(hào) : 20951914( 2018) 03010107Effects of Alternaria Toxin on the Contentsof Nutrients in osa chinensisLi Yunxian1， 2， Li Yongmei3， Yang Fazhong2， Li Jing4( 1 College of Plant Protection， Yunnan Agricultural University， Kunming Yunnan 650201， China;2 College of Chemical Engineering， Southwest Forestry University， Kunming Yunnan 650224， China;3 College of esources and Environment， Yunnan Agricultural University， Kunming Yunnan 650201， China;4 College of Life Science， Southwest Forestry University， Kunming Yunnan 650224， China)Abstract: osa chinensis was treated with tenuazonic acid ( TeA) toxin of Alternaria tenuissima To determinethe content of protein， water， soluble sugar and elements in treated and above and below treatment site leaves of. chinensis after 2， 6， 10， 14， 20 days The methods are: Kjeldahl method， drying method， anthrone colorimetricmethod and inductively coupled plasma emission spectrometer ( ICP-OES) The findings indicated that comparedwith healthy leaves， the contents of protein， water and soluble sugar in leaves treated with TeA decreased signifi-cantly The change of protein content is complex， after 6 days treatment， the content of protein increased signifi-cantly， then it decreases with the increase of treated time Protein content decreased from 208. 41 mg/g to 145. 09mg/g; Moisture content decreased from 77. 36% to 69. 56%， dropped by 7. 79%; Soluble sugar content decreasedfrom 12. 58 mg/g to 8. 45 mg/g After treated by the A. tenuissima toxin TeA， the content of mineral elements inrose leaves have changed， Ca， Mg， K， S， P， Zn et al decreased， but Al， Cu， Mn， Na et al increased The toxin收稿日期 : 20180110; 修回日期 : 20180304基金項(xiàng)目 : 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目利 ( 31560517、31160354) 資助 ; 云南省中青年學(xué)術(shù)與技術(shù)帶頭人培養(yǎng)項(xiàng)目 ( 2015HB049) 資助 。第 1 作者 : 李云仙 ( 1980) ， 女 ， 博士研究生 ， 實(shí)驗(yàn)師 。研究方向 : 化學(xué)生態(tài)學(xué) 。Email: liyunxian 163com。通信作者 : 李永梅 ( 1966) ， 女 ， 教授 。研究方向 : 植物營(yíng)養(yǎng) 。Email: youngmaylee 126com。TeA treatment has a spatial effect， which affects the nutrient above and below the treated leavesKey words: osa chinensis; Alternaria tenuissima toxin; water; protein; mineral element; soluble sugar植物體進(jìn)化了一系列防御機(jī)制來防止昆蟲的取食 ， 這些機(jī)制主要分為兩類 : 組成型防御反應(yīng)和誘導(dǎo)型防御反應(yīng) ， 組成型防御反應(yīng)是植物固有的防御反應(yīng) ， 具有特異性 ， 以儲(chǔ)存化合物 、結(jié)合化合物或活化化合物前體的形式存在 ， 這些物質(zhì)都很容易受傷害誘導(dǎo)激發(fā) ， 迄今為止 ， 大多數(shù)的防御反應(yīng)都是組成型的防御反應(yīng) 。誘導(dǎo)型防御反應(yīng)僅發(fā)生在植物被傷害之后 ， 例如 ， 當(dāng)植物遭遇食草動(dòng)物侵襲時(shí) ， 體內(nèi)茉莉酸水平迅速升高 ， 促使植物中許多參與反應(yīng)的蛋白質(zhì)合成 13。植物受病原物侵染后 ， 其體內(nèi)的蛋白質(zhì)含量會(huì)發(fā)生變化 4， 植物病原菌的入侵能引起寄主植物產(chǎn)生一系列的生理生化和代謝變化 ， 如一些專性寄生真菌侵染后常會(huì)使寄主植物葉綠體的非環(huán)式電子傳遞受到抑制 5。中國(guó)月季感染白粉菌后 ， 體內(nèi)蛋白質(zhì) 、糖的含量以及礦質(zhì)元素的種類和含量均發(fā)生了變化 67。在侵染后期 ， 許多病原物可引起寄主植物的質(zhì)膜透性改變 ， 葉表的保護(hù)組織受到破壞 ， 導(dǎo)致水分大量流失 ， 造成寄主植物局部壞死 ，尤其是寄主在感染銹病后 ， 表皮被成熟的銹孢子突破甚至撕裂 ， 表皮層和角質(zhì)層受到了損害 ， 失去了保護(hù)葉片的作用 ， 蒸騰作用會(huì)大大加強(qiáng) 8，使植物的生長(zhǎng)發(fā)育受到影響 。有研究發(fā)現(xiàn) ， 病原菌侵染對(duì)昆蟲存在有利或者不利影響 ， 例如象蟲 ( Apion onopordi) 在銹菌( Puccinia punctiformis) 感染的田薊 ( Cirsium arvense)上 ， 比在健康田薊上有更高的存活率 9; 甜菜夜蛾 ( Spodoptera exigua) 對(duì)感染白粉病 ( Sphaerothecapannosa) 的中國(guó)月季 ( osa chinensis) 取食和產(chǎn)卵量均明顯下降 10。目前 ， 對(duì)于病蟲之間通過寄主植物的介導(dǎo)作用而進(jìn)行的間接相互作用的研究很少見報(bào)道 ， 特別是對(duì)這種通過病原真菌毒素誘導(dǎo)寄主植物產(chǎn)生對(duì)植食性昆蟲抗性的機(jī)理的研究還未見報(bào)道 。鏈格孢菌 ( Alternaria tenuissima) 屬真菌門 、半知菌亞門 、絲孢綱 、絲孢目 ， 是一類自然界中普遍存在的植物致病菌 ， 其致病的主要機(jī)理是通過產(chǎn)生多種毒素 ， 造成被侵染植物組織的病理反應(yīng)和傷害 ， 鏈格孢菌毒素能破壞質(zhì)膜 、葉綠體 、以及線粒體的結(jié)構(gòu) ， 從而影響細(xì)胞正常代謝 11。鏈格孢菌 ( Alternaria sp) 粗毒素處理中國(guó)月季對(duì)月季長(zhǎng)管蚜有十分明顯的抑制作用 1213。毒素處理后的中國(guó)月季對(duì)月季長(zhǎng)管蚜表現(xiàn)出明顯的趨避作用的機(jī)理目前仍然不清楚 。在病蟲互作關(guān)系的研究中 ， 寄主植物介導(dǎo)的間接病蟲互作關(guān)系的影響機(jī)理仍不清楚 ， 需要對(duì)寄主植物生理生化方面進(jìn)行進(jìn)一步研究 ， 本實(shí)驗(yàn)對(duì)進(jìn)一步探討寄主 、病害 、蟲害三者互作機(jī)理具有重要的參考意義 。1 材料與方法1. 1 實(shí)驗(yàn)材料樣品采自云南省昆明市呈貢 、昆陽(yáng)等月季種植基地 ， 選取無病蟲害生長(zhǎng)基本一致的植株于大棚中培養(yǎng) 50 d 后備用 ; 鏈格孢菌是從斗南中國(guó)月季種植基地的月季上按照常規(guī)方法分離純化得到 。儀器及試劑主要有 : 自動(dòng)凱氏定氮儀 ( 瑞典 FOS-STECATO 公司 ， 2300 型 ) ; 樣品消化器 ( 瑞典FOSSTECATO 公司 ， 2300 型 ) ; 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)儲(chǔ)備液 ; 40%氫氧化鈉溶液 ; 濃硫酸 ( 分析純 ) ;高純氬氣 ( 99. 999%) ; 微波消解儀 ( 美國(guó) CEM，Mars5) ; VISFA-MPX 型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀 ( 美國(guó) VAIAN 公司 ) ; 可見分光光度計(jì) ; 各種礦質(zhì)元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 ( 國(guó)家鋼鐵材料測(cè)試中心 ) ， 濃度為 1 000 g/mL; 硝酸 、雙氧水為優(yōu)級(jí)純 ; 超純水 ; 玻璃儀器均經(jīng) 10%HNO3浸泡過夜 ，用超純水清洗 。1. 2 實(shí)驗(yàn)方法1. 2. 1 鏈格孢菌粗毒素的提取及細(xì)交鏈孢菌酮酸的分離制備將分離純化的鏈格孢菌株種在 PDA 培養(yǎng)基上 ，倒置培養(yǎng)至菌落鋪滿平板 。3 平板為一組 ， 將菌株連同培養(yǎng)基用刀片劃成 1 cm× 1 cm大小的小塊放置于錐形瓶?jī)?nèi) ， 向錐形瓶?jī)?nèi)倒入有機(jī)提取液 ( V ( 乙酸乙酯 ) V ( 甲醇 ) V ( 冰醋酸 )= 80 15 5) ，使提取液剛好沒過菌株和培養(yǎng)基 。重復(fù)提取 3 次 ，合并提取液 。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干 ， 用 4 mL 甲醇將固體萃取物溶解 ， 裝在 5 mL 凍存管中 ， 4 保存 。提取到的粗毒素經(jīng) 0. 45 m 濾膜過濾后 ， 進(jìn)樣到 HPLC 中進(jìn)行分析制備 ， 流動(dòng)相為 100%乙腈 ， 流速為 0. 6 mL/min; 進(jìn)樣量 20L; 檢測(cè)波長(zhǎng) 280 nm。當(dāng)目標(biāo)峰出現(xiàn)時(shí) ， 收集流出物 ， 通過多次收集目201 西 南 林 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 38 卷標(biāo)組分的洗脫液 ， 并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干后 ， 就獲得了高濃縮的洗脫液 ， 合并濃縮后的洗脫液 ，20 保存?zhèn)溆?。將獲得的 TeA 用高效液相色譜再次分析 ， 與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比驗(yàn)證所得目標(biāo)產(chǎn)物是否一致 。1. 2. 2 毒素細(xì)交鏈孢菌酮酸處理月季用一定濃度的細(xì)交鏈孢菌酮酸 ( TeA) 溶液均勻噴灑經(jīng)溫室大棚培養(yǎng)的無病蟲害月季 ( 每天噴灑1 次 ) ， 選擇月季植株中間的 1 株復(fù)葉噴灑 ， 位于這株復(fù)葉以上和以下的復(fù)葉不做處理 ， 測(cè)定 2， 6，10， 14， 20 d 后葉片中蛋白質(zhì) 、糖 、水分和礦質(zhì)元素的含量 。以相應(yīng)健康植株葉片作為對(duì)照 。1. 3 測(cè)定方法1. 3. 1 葉片蛋白質(zhì)含量的測(cè)定健康和 TeA 處理后的中國(guó)月季葉片洗凈烘干粉碎后裝袋備用 。稱取 0. 1 g 樣品于洗凈干燥的消化管內(nèi) ， 每個(gè)試樣做 3 個(gè)平行對(duì)照 ， 稱取配制好的m ( K2SO4) m ( CuSO4) 比例為 5 1 的催化劑 ，吸取濃硫酸 10 mL 于消化管中 ， 將加好試劑的消化管放到消化爐上預(yù)熱 30 min ( 200 ) ， 消化溫度為420 ， 消化至反應(yīng)液呈透明藍(lán)綠色 ， 消化時(shí)間為1. 5 h 左右 ， 取出冷卻 1520 min， 將消化管放入2300 型全自動(dòng)凱氏定氮儀 ， 關(guān)上安全門 ， 儀器自動(dòng)進(jìn)行蒸餾 、滴定 、計(jì)算最后記錄結(jié)果 。1. 3. 2 葉片可溶性糖含量的測(cè)定可溶性糖含量的測(cè)定用葸酮比色法 ， 測(cè)定步驟如下 。1) 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 : 葡萄糖在 80 烘箱中烘至恒質(zhì)量 ， 精確稱取 2. 0000 g， 加蒸餾水溶解 ， 并定容至 1 L， 4 保存 。使用時(shí)稀釋 10 倍 。得到含糖量為 0. 2 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液 ， 用蒸餾水將標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液稀釋成一系列 0100 g/mL 的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 ， 放入 7 支具塞試管中 ， 分別吸取 1 mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液于試管中 ， 各加入 5 mL 蒽酮試劑 ， 混勻 ， 沸水浴 10 min， 冷卻 ， 用分光光度計(jì)測(cè)定 625 nm 處的吸光度 ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。2) 樣品中可溶性糖的提取 : 稱取樣品 0. 5 g 左右 ， 剪碎研磨至勻漿 ， 倒入三角瓶中 。加入 10 mL80% 乙 醇 ; 80 水 浴 20 min， 不斷攪拌 ， 冷卻 ;4 000 r/min 離心 5 min， 殘?jiān)屑?5 mL 80%乙醇 。重復(fù)在 80 水浴中提取 2 次 ， 合并上清液 ; 加入10 mg 活性炭 ， 80 水浴 15 min， 過濾 ， 定容至 25mL， 取 0. 2 mL 樣品提取液 ; 加入 0. 8 mL 蒸餾水 ，混合 ; 再加入 5 mL 蒽酮試劑 ， 小心混合 ， 沸水浴10 min， 冷卻 。用分光光度計(jì)測(cè)定 625 nm 處的吸光度的值 ， 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上的方程得到提取液中糖含量 。1. 3. 3 葉片水分的測(cè)定水分含量測(cè)定參考 14的方法稍作改動(dòng) ， 采用烘箱烘干的方法進(jìn)行測(cè)定 。把采集到的健康和毒素 TeA 處理后的中國(guó)月季葉片洗干凈然后晾干 ，精密稱取一定量的新鮮葉片 ， 60 烘干至恒質(zhì)量 ，根據(jù)失去水分的質(zhì)量計(jì)算出葉片的含水率 。健康和毒素 TeA 處理后的葉片各平行測(cè)定 5 次 ， 取平均值 。1. 3. 4 葉片礦質(zhì)元素的測(cè)定1) 樣品消解 。采集毒素處理后的月季葉片和健康月季葉片 ， 于烘箱中 80 烘干 ， 烘干后的樣品取出用研缽研碎 ， 然后分別精確稱取 0. 20. 3 g樣品倒入消解罐中 ， 精確到 0. 1 mg， 依次加入 5mL 濃硝酸 ， 2 mL 雙氧水 ， 然后把消解罐置于微波消解儀中 。按表 1 程序進(jìn)行消解 ， 消解完成后待溫度冷卻至室溫 ， 將消解罐中的液體轉(zhuǎn)移到 50 mL 容量瓶中 ， 用 5%硝酸定容 。平行測(cè)定 3 次并做空白試驗(yàn) 15。2) 分析譜線的選擇 。為了避免待測(cè)礦質(zhì)元素之間相互影響和干擾譜線 ， 每個(gè)元素均選取 2 3條特征譜線進(jìn)行測(cè)定 ， 綜合強(qiáng)度分析 、干擾情況 、穩(wěn)定性等因素 ， 選擇干擾比較小 、精密度比較高的適合待測(cè)樣品的分析線作為儀器的工作分析譜線 。3) 工作曲線的建立 。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)空白溶液和不同濃度的各種礦質(zhì)元素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 ， 注入電感耦合等離子體光譜儀 ( ICP-OES) 中 ， 在選定的儀器參數(shù)下 ， 用標(biāo)準(zhǔn)系列濃度的溶液進(jìn)樣 5 次 ，以平均吸收強(qiáng)度對(duì)各元素濃度做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程 ， 并獲得相應(yīng)的相關(guān)系數(shù) 2應(yīng)不小于 0. 999。4) 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn) 。各待測(cè)元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液按一定的量分別加入到實(shí)驗(yàn)樣品中 ， 按消解樣品的方法進(jìn)行消解 ， 按照樣品測(cè)定方法重復(fù)測(cè)定 5 次 。加標(biāo)回收率= (加標(biāo)試樣測(cè)定值試樣測(cè)定值 ) /加標(biāo)量× 100%;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 ( SD)=標(biāo)準(zhǔn)偏差( SD) /計(jì)算結(jié)果的算術(shù)平均值 ( X) ×100%。2 結(jié)果與分析2. 1 毒素處理后月季葉片中蛋白質(zhì)含量變化毒素處理月季葉片蛋白質(zhì)含量的時(shí)間和空間變化見圖 1。301第 3 期 李云仙等 : 鏈格孢菌毒素對(duì)中國(guó)月季主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的影響圖 1 毒素處理月季葉片蛋白質(zhì)含量的時(shí)間和空間變化Fig. 1 Temporal and spatial changes of protein contentin leaves of . chinensis with toxin從圖 1 可看出 ， 與健康葉片相比 ， 處理 2 d 后葉片內(nèi)蛋白質(zhì)含量已經(jīng)下降 ， 但是感病 6 d 后 ， 葉片中蛋白質(zhì)含量突然增高 ， 后隨處理時(shí)間延長(zhǎng)而進(jìn)一步降低 ， 從 208. 41 mg/g 降低至 145. 09 mg/g，差異達(dá)顯著水平 ( P 0. 05) 。毒素處理月季對(duì)其葉片中蛋白質(zhì)含量存在一定的空間效應(yīng) ， 而且對(duì)上方空間影響大于下方 ， 處理 20 d 時(shí) ， 上方月季葉片中蛋白質(zhì)含量下降比下方月季葉片中蛋白質(zhì)含量大 ?？傮w來看 ， 蛋白質(zhì)的含量隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低 ， 3 個(gè)部位的蛋白質(zhì)含量都與處理時(shí)間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系 。2. 2 毒素處理后月季葉片中可溶性糖含量變化毒素處理前后月季葉片中可溶性糖含量的時(shí)間和空間變化變化見圖 2。圖 2 毒素處理前后月季葉片中可溶性糖含量的時(shí)間和空間變化變化Fig. 2 Temporal and spatial changes of soluble sugar contentin leaves of . chinensis treated with toxin由圖 2 可以看出 ， 隨 TeA 處理時(shí)間的增加 ，葉片內(nèi)可溶性糖含量呈下降趨勢(shì) ， 呈明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系 。且處理部位可溶性糖下降量顯著高于處理部位以上和以下的葉片 ， 3 個(gè)部位可溶性糖含量均下降 ， 說明 TeA 處理對(duì)月季葉片可溶性糖含量的影響存在時(shí)空效應(yīng) 。2. 3 毒素處理后月季葉片中水分含量變化毒素處理月季葉片水分含量的時(shí)間和空間變化見圖 3。圖 3 毒素處理月季葉片水分含量的時(shí)間和空間變化Fig. 3 Temporal and spatial changes of water contentin leaves of . chinensis with toxin從圖 3 可知 ， 鏈格孢菌毒素對(duì)月季葉片水分含量的影響很大 ， 毒素處理 2 d 后 ， 月季葉片含水量開始明顯下降 ， 并隨處理時(shí)間的增加而顯著降低 ，到 20 d 時(shí) ， 與健康葉片相比 ， 水分含量下降 8. 04%左右 。同時(shí) ， 毒素處理月季對(duì)其葉片中水分含量存在明顯的空間效應(yīng) ， 位于處理葉片上方和下方的葉片含水量也隨之下降 ， 處理時(shí)間在 10 d 以前 ，與處理時(shí)間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系 。10 d 以后 ， 水分含量幾乎不再變化 。2. 4 毒素處理前后月季中礦質(zhì)元素含量的變化用電感耦合等離子體光譜儀 ( ICP-OES) 測(cè)定了鏈格孢菌毒素 TeA 處理中國(guó)月季植株后 ， 月季葉片中礦質(zhì)元素的含量 ， 測(cè)定結(jié)果見表 12。由表 12 可知 ， 健康中國(guó)月季葉片和用鏈格孢菌毒素處理后的月季葉片中均檢測(cè)出 17 種元素 ，Ca、Mg、K、S、P 在 2 種葉片中含量都很高 ， 與健康葉片對(duì)比 ， Ca、Mg、K、S、P、Sn、Zn 在毒素處理后的葉片中含量均明顯下降 ( P 0. 05) ，且下降量隨處理時(shí)間的增加而增大 。Al、B、Cu、401 西 南 林 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 38 卷Mn、Na、Si、Sr 7 種元素在毒素處理后的葉片內(nèi)含量高于健康葉片 ， 在處理 6 d 后 ， B、Cu、Mn、Na、Si、Sr 6 種元素含量顯著高于健康葉片 ( P 0. 05) ; 由此可以看出 ， 中國(guó)月季用鏈格孢菌毒素( TeA) 處理后多種礦質(zhì)元素含量發(fā)生變化 ， 10 種元素含量降低 ， 有 7 種元素含量升高 ， 含量降低的礦質(zhì)元素主要是一些對(duì)植物生命代謝起著重要作用的元素 ， 例如 Ca、Mg、K、S、P， 下降幅度比較大 。Al、B、Cu、Mn、Na、Si、Sr 在毒素處理后的葉片中含量升高 ， 其中 Na 含量增大較多 ， TeA 處理后的第 2 天 ， Na 含量由 53. 37 g/g 上升 1 015. 42g/g， 增加了將近 20 倍 ， 之后有所下降 ， 但仍然比對(duì)照高 10 倍以上 ; Ba、Be、Ca、Mg、K、Mn、Fe 等元素變化較復(fù)雜 ， 呈現(xiàn)先降低后又升高之后又降低的趨勢(shì) ; Al 和 Si 含量在第 20 天最高 ， 分別為 46. 19 g/g 和 203. 21 g/g， Mn 元素在處理 2天后 ， 含量降低 ， 之后又直線升高 ; 位于處理部位上方和下方的葉片中礦質(zhì)元素的變化和鏈格孢菌毒素 ( TeA) 處理部位葉片中礦質(zhì)元素含量的變化一致 ， 說明 TeA 處理對(duì)月季葉片礦質(zhì)元素含量的變化存在一定的空間效應(yīng) 。與處理部位葉片中礦質(zhì)元素含量不同之處有 : Al 元素含量在第 10 天達(dá)到最高 ， 之后又下降 ; Na 元素含量增高的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于處理部位 ， Mn 元素含量增大量比處理部位高 。礦質(zhì)元素的這種變化趨勢(shì)可能與植物抗蟲性有關(guān) ， 需要進(jìn)一步研究 。表 1 鏈格孢菌毒素 TeA 處理中國(guó)月季后葉片大量元素時(shí)間和空間的含量變化 ( g/g)Table 1 Temporal and spatial changes of major elements contents in leaves of . chinensis leaves treated with TeA元素處理部位處理時(shí)間 /d0 2 6 10 14 20Ca 上 95 602. 94±1. 98 53 585. 390±0. 52 85 440. 420±1. 25 85 190. 110±1. 41 78 433. 340±1. 20 77 748. 200±2. 58中 50 675. 560±1. 29 67 190. 520±1. 22 77 655. 840±1. 07 74 307. 790±1. 13 73 941. 800±1. 92下 61 491. 670±1. 33 74 355. 670±1. 82 76 365. 810±1. 42 81 315. 330±1. 93 77 304. 010±1. 21K 上 27 014. 91±2. 23 21 258. 030±1. 12 20 341. 330±1. 52 20 341. 330±2. 89 24 067. 280±1. 74 24 028. 070±3. 32中 17 418. 050±2. 88 19 481. 380±1. 66 19 027. 800±1. 12 25 144. 540±3. 52 23 273. 170±1. 59下 18 693. 960±3. 45 17 937. 200±1. 20 19 454. 870±1. 05 23 144. 340±1. 73 22 959. 140±1. 425Mg 上 46 353. 70±3. 87 40 439. 410±1. 45 44 789. 790±1. 34 44 789. 790±2. 80 44 010. 600±1. 23 36 988. 980±1. 51中 38 535. 610±1. 45 38 293. 310±1. 24 41 881. 260±1. 66 37 418. 650±0. 65 32 925. 720±1. 08下 35 502. 270±1. 56 40 312. 450±1. 05 39 389. 770±1. 26 37 164. 160±1. 094 38 462. 470±1. 44S 上 3 149. 50±0. 68 1 722. 185±1. 13 2 521. 442±1. 25 2 521. 442±1. 69 2 459. 552±1. 82 1 810. 222±1. 01中 2 073. 312±1. 48 2 474. 856±1. 26 2 173. 930±3. 27 2 146. 164±1. 95 1 549. 330±0. 94下 1 920. 816±1. 34 2 444. 197±1. 93 2 096. 665±1. 50 2 201. 645±1. 59 1 599. 729±1. 47P 上 3 124. 67±1. 56 3 419. 253±1. 55 3 547. 661±2. 06 3 547. 661±1. 26 2 997. 864±2. 97 2 556. 238±1. 37中 3 493. 392±3. 41 3 437. 159±1. 97 2 872. 928±2. 34 2 904. 586±1. 86 2 321. 464±1. 32下 2 988. 035±1. 29 3 082. 575±1. 74 2 518. 086±1. 08 2 984. 731±1. 18 2 405. 134±1. 09注 : 處理部位為 “中 ”， 上 、下表示位于處理部位以上和以下的葉片 ， 0、2、6、10、14、20 表示處理時(shí)間 ， 0 為健康葉片 ( 對(duì)照 ) 。表 2 鏈格孢菌毒素 TeA 處理中國(guó)月季后葉片微量元素時(shí)間和空間的含量變化 ( g/g)Table 2 Temporal and spatial changes of microelements contents in leaves of . chinensis treated with TeA元素處理部位處理時(shí)間 /d0 2 6 10 14 20Al 上 28. 38 ± 0. 15 28. 76 ± 0. 63 33. 57 ± 0. 32 45. 57 ± 0. 61 32. 75 ± 0. 32 29. 87 ± 0. 67中 26. 10 ± 0. 72 49. 66 ± 0. 96 45. 26 ± 0. 88 41. 03 ± 0. 68 46. 19 ± 0. 33下 29. 06 ± 0. 21 32. 46 ± 0. 07 45. 25 ± 0. 85 30. 67 ± 0. 35 37. 64 ± 0. 24B 上 15. 76 ± 0. 55 16. 09 ± 0. 72 21. 62 ± 0. 81 21. 62 ± 0. 24 28. 06 ± 0. 42 26. 81 ± 0. 15中 20. 42 ± 0. 58 19. 77 ± 0. 81 31. 49 ± 0. 88 27. 42 ± 0. 91 24. 23 ± 0. 61下 21. 31 ± 0. 08 21. 49 ± 0. 50 29. 05 ± 0. 69 26. 92 ± 0. 97 28. 79 ± 0. 38501第 3 期 李云仙等 : 鏈格孢菌毒素對(duì)中國(guó)月季主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的影響續(xù)表 2元素處理部位處理時(shí)間 /d0 2 6 10 14 20Ba 上 2. 83 ± 0. 23 1. 32 ± 0. 52 2. 24 ± 0. 42 2. 24 ± 0. 81 2. 27 ± 0. 76 2. 27 ± 0. 62中 1. 40 ± 0. 24 1. 86 ± 0. 76 2. 06 ± 0. 15 2. 59 ± 0. 32 2. 40 ± 0. 18下 1. 56 ± 0. 15 2. 52 ± 0. 54 2. 60 ± 0. 11 2. 20 ± 0. 38 2. 16 ± 0. 15Be 上 0. 55 ± 0. 03 0. 24 ± 0. 09 0. 20 ± 0. 08 0. 20 ± 0. 07 0. 41 ± 0. 06 0. 11 ± 0. 02中 0. 37 ± 0. 01 0. 33 ± 0. 02 0. 21 ± 0. 04 0. 48 ± 0. 04 0. 10 ± 0. 02下 0. 18 ± 0. 04 0. 33 ± 0. 04 0. 16 ± 0. 06 0. 46 ± 0. 02 0. 10 ± 0. 01Cu 上 4. 73 ± 0. 12 6. 86 ± 0. 68 9. 94 ± 0. 55 9. 94 ± 0. 70 8. 78 ± 0. 71 7. 62 ± 0. 47中 7. 22 ± 0. 76 9. 28 ± 0. 76 7. 98 ± 0. 25 9. 39 ± 0. 32 7. 60 ± 0. 17下 5. 85 ± 0. 09 8. 20 ± 0. 73 6. 98 ± 0. 59 8. 64 ± 0. 56 7. 35 ± 0. 04Fe 上 282. 25 ± 0. 44 200. 06 ± 0. 91 232. 22 ± 0. 77 232. 22 ± 0. 31 184. 28 ± 0. 75 213. 58 ± 0. 24中 239. 64 ± 0. 47 274. 29 ± 0. 22 230. 99 ± 0. 91 227. 66 ± 0. 10 200. 33 ± 0. 54下 171. 60 ± 0. 65 565. 89 ± 0. 14 253. 97 ± 0. 56 698. 25 ± 0. 88 199. 21 ± 0. 20Mn 上 225. 40 ± 0. 88 255. 24 ± 0. 56 417. 64 ± 0. 69 417. 64 ± 0. 91 569. 95 ± 0. 87 550. 90 ± 0. 63中 222. 76 ± 0. 74 495. 04 ± 1. 81 411. 98 ± 0. 88 430. 45 ± 0. 97 528. 44 ± 0. 13下 296. 55 ± 0. 11 550. 84 ± 0. 74 429. 13 ± 0. 49 518. 41 ± 0. 79 529. 37 ± 0. 98Na 上 53. 37 ± 0. 75 81. 24 ± 0. 42 112. 86 ± 1. 97 112. 86 ± 0. 11 90. 65 ± 0. 81 60. 69 ± 0. 14中 1015. 43 ± 1. 49 780. 35 ± 0. 49 726. 72 ± 0. 54 895. 78 ± 0. 81 807. 60 ± 0. 23下 117. 75 ± 1. 09 250. 22 ± 0. 61 106. 06 ± 0. 21 69. 70 ± 0. 55 286. 77 ± 0. 79Si 上 80. 63 ± 0. 50 81. 21 ± 0. 06 92. 31 ± 0. 77 92. 31 ± 0. 71 168. 97 ± 0. 48 191. 50 ± 0. 14中 91. 04 ± 0. 73 111. 86 ± 0. 99 149. 70 ± 0. 95 166. 18 ± 0. 14 203. 22 ± 0. 49下 100. 39 ± 0. 32 120. 06 ± 0. 74 164. 14 ± 0. 63 176. 55 ± 0. 17 202. 56 ± 0. 59Sn 上 73. 83 ± 0. 59 69. 49 ± 0. 34 60. 35 ± 0. 70 60. 35 ± 0. 55 62. 51 ± 0. 87 63. 84 ± 0. 16中 71. 16 ± 0. 56 66. 17 ± 0. 33 66. 76 ± 0. 13 64. 00 ± 0. 04 70. 86 ± 0. 07下 66. 88 ± 0. 57 66. 45 ± 0. 42 67. 69 ± 0. 13 66. 12 ± 0. 52 68. 15 ± 0. 06Sr 上 12. 64 ± 0. 56 13. 73 ± 0. 76 21. 34 ± 0. 50 21. 34 ± 0. 41 32. 04 ± 0. 17 26. 27 ± 0. 70中 12. 67 ± 0. 89 17. 12 ± 0. 73 24. 95 ± 0. 27 26. 15 ± 0. 51 25. 21 ± 0. 67下 18. 26 ± 0. 99 19. 24 ± 0. 06 21. 68 ± 0. 13 27. 70 ± 0. 16 27. 12 ± 0. 76Zn 上 54. 87 ± 0. 80 35. 86 ± 0. 44 40. 68 ± 0. 65 40. 68 ± 0. 53 33. 69 ± 0. 27 25. 50 ± 0. 71中 35. 93 ± 0. 83 34. 62 ± 0. 52 29. 11 ± 0. 39 26. 89 ± 0. 12 27. 49 ± 0. 74下 27. 84 ± 0. 82 32. 00 ± 0. 91 27. 33 ± 0. 45 30. 66 ± 0. 34 24. 01 ± 0. 24注 : 處理部位為 “中 ”， 上 、下表示位于處理部位以上和以下的葉片 ， 0、2、6、10、14、20 表示處理時(shí)間 ， 0 為健康葉片 ( 對(duì)照 ) 。3 結(jié)論與討論中國(guó)月季用鏈格孢菌毒素 TeA 處理后 ， 葉片內(nèi)蛋白質(zhì) 、可溶性糖 、水分含量與健康葉片相比均明顯下降 ， 并且鏈格孢菌毒素 TeA 侵染中國(guó)月季葉片后 ， 三者都存在時(shí)間和空間效應(yīng) ， 隨處理天數(shù)的增加 ， 水分和可溶性糖含量下降程度增大 ，蛋白質(zhì)含量變化則呈現(xiàn)出較復(fù)雜的一個(gè)變化趨勢(shì) ，在處理 6 d 后月季葉片蛋白質(zhì)含量高于健康葉片 ，之后又明顯下降 ， 這個(gè)現(xiàn)象可能是因?yàn)?， 月季受病原菌侵染后 ， 體內(nèi)茉莉酸水平迅速升高 ， 促使植物中許多參與反應(yīng)的蛋白質(zhì)合成 ， 是植物主動(dòng)防御的一個(gè)表現(xiàn) ， 之后 ， 蛋白質(zhì)含量顯著下降 ， 可能是毒素進(jìn)入葉片影響質(zhì)膜通透性 ， 造成葉片細(xì)胞程序性死亡 ， 進(jìn)而也導(dǎo)致葉片水分喪失 ， 水分含量降低 。Ca、Mg、K 等礦質(zhì)元素對(duì)昆蟲正常的生長(zhǎng)發(fā)育起著關(guān)鍵的作用 ， 與健康葉片相比 ， TeA處理后的月季葉片中 ， Ca、Mg、K、S、P、Zn 這幾種元素含量顯著降低 ， 表明鏈格孢菌毒素對(duì)月601 西 南 林 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 38 卷季生長(zhǎng)發(fā)育 、生理代謝有較大影響 ， 這可能是毒素處理月季葉片后影響月季長(zhǎng)管蚜搜尋寄主及生長(zhǎng)發(fā)育的重要原因之一 。月季葉片中 Al、B、Cu、Mn、Na、Si、Sr 7 種元素在毒素處理后含量大幅增高 ， 這可能與植物抗病性有關(guān) ， 有研究表明 :病原菌侵染中國(guó)月季后 ， 月季體內(nèi) Al、B、Cu、Mn 元素含量增高 ; 月季外施礦質(zhì)元素后提高了月季對(duì)長(zhǎng)管蚜的抗性 ， 礦質(zhì)元素通過植物介導(dǎo)影響蚜蟲與