結(jié)球甘藍自花和異花授粉誘導的柱頭轉(zhuǎn)錄組分析.pdf
<p>園藝學報， 2018， 45 (1)： 71 84. Acta Horticulturae Sinica doi： 10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0480； http： /www. ahs. ac. cn 71 收稿日期 ： 2017 08 25； 修回日期 ： 2017 11 06 基金項目 ： 國家自然科學基金項目（ 31572127） ；重慶市研究生科研創(chuàng)新項目（ CYS16076） * 同等貢獻者 * 通信作者 Author for correspondence（ E-mail： zhuliquanswu.edu.cn） 結(jié)球甘藍自花和異花授粉誘導的柱頭轉(zhuǎn)錄組分析 蒲 敏1，廉小平2,*， 羅紹蘭1， 張賀翠1， 王玉奎1， 白曉 璟1， 曾 靜1， 高啟國2， 任雪松2， 朱利泉1,*（1西南大學農(nóng)學與生物科技學院，重慶 400700；2重慶市蔬菜重點實驗室，重慶 400700） 摘 要： 分別以自花授粉 30 min、異花授粉 30 min 和未授粉處理的甘藍柱頭進行 Illumina HiSeq2000高通量轉(zhuǎn)錄組測序，分析自交不親和性甘藍自花授粉、異花授粉柱頭與未授粉柱頭中基因表達的差異。轉(zhuǎn)錄組測序共獲得 1.6 × 108對原始序列讀取片段，總堿基數(shù)為 2.38 × 1010bp，與未授粉對照相比，自花、異花授粉后差異表達的基因分別有 2 900 個和 2 328 個，共有的差異表達基因 1 904 個。在差異表達基因背景和全部基因背景下，自花授粉較大比例的差異基因是細胞殺傷、胞外基質(zhì)部分和核酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性；異花授粉較大比例的差異基因是信號傳遞、胞外區(qū)域部分、結(jié)構(gòu)分子活性和營養(yǎng)庫活性。 GO 功能的顯著性富集分析表明，自花授粉處理后特有的 40 個極顯著的富集條目主要涉及糖跨膜轉(zhuǎn)運活性、微管結(jié)合和鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶活性等。異花授粉特有的 53 個極顯著的富集條目主要涉及法尼酸 O甲基轉(zhuǎn)移酶的活性、微管負向運動和生長素跨膜運輸?shù)取Ｗ曰ㄊ诜厶幚砗筇禺惒町惐磉_的 996 個基因主要涉及鈣離子結(jié)合、細胞骨架相關(guān)、茉莉酸和水楊酸代謝等生物過程，異花授粉處理后特異差異表達的 424個基因主要涉及物質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)運及脂質(zhì)代謝。 關(guān)鍵詞： 結(jié)球甘藍；自交不親和性；轉(zhuǎn)錄組；差異表達基因 中圖分類號： S 635.1 文獻標志碼： A 文章編號： 0513-353X（ 2018） 01-0071-14 Transcriptome Analysis of Stigma After Pollination in Brassica oleracea var. capitata PU Min1， LIAN Xiaoping2,*， LUO Shaolan1， ZHANG Hecui1， WANG Yukui1， BAI Xiaojing1， ZENG Jing1， GAO Qiguo2， REN Xuesong2， and ZHU Liquan1,*（1College of Agronomy and Biotechnology， Southwest University， Chongqing 400700， China；2 Key Laboratory in Olericulture of Chongqing， Chongqing 400700， China） Abstract： Illumina HiSeq2000， a high-through transcriptome sequencing technology， was applied to obtain the transcriptome differential expression data of stigma after self-pollinated 30 min， cross-pollinated 30 min and unpollinated. The objective of this study is to analyze the differences of gene expression of stigma after self-pollination and cross-pollination in Brassica oleracea L. var. capitata， and further analyze the significantly different expression genes. Transcriptome sequencing obtains a total of 2.38 × 1010bp bases Pu Min， Lian Xiaoping， Luo Shaolan， Zhang Hecui， Wang Yukui， Bai Xiaojing， Zeng Jing， Gao Qiguo， Ren Xuesong， Zhu Liquan. Transcriptome analysis of stigma after pollination in Brassica oleracea var. capitata. 72 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (1)： 71 84. containing 1.6 × 108of the original pair-end reads. There were 2 900 and 2 328 genes with altered expression in stigma after self-pollination and cross-pollination in Brassica oleracea L. var. capitata， respectively，and a total of 1 904 common genes expressed between two samples. The greater proportional difference after self-pollination is cell killing， extracellular matrix part and nucleic acid binding transcription factor activity. The greater proportional difference after cross-pollination is the signaling， extracellular region part， nutrient reservoir activity and structural molecule activity in the background of differential expression genes and all genes. GO enrichment analysis illustrated that the 40 specific highly significant GO terms in self-pollination sample mainly involved in sugar transmembrane transporter activity，tubulin binding and calmodulin-dependent protein kinase activity. The 53 specific highly significant GO terms in cross-pollination sample mainly involved in farnesoic acid O-methyltransferase activity，minus-end-directed microtubule motor activity and auxin influx transmembrane transporter activity. About 563 and 453 genes their expression was significantly up-regulated and down-regulated respectively in the 996 specific differentially expressed genes in self-pollination sample， which mainly related to calciumion binding， cytoskeletal correlation， jasmonic acid mediated signalin0g pathway and salicylic acid mediated signaling pathway. The 424 specific differentially expressed genes in cross-pollination sample mainly involved in transmembrane transport of substance and lipid metabolism Keywords： Brassica oleracea L.var. capitata； self-incompatibility； transcriptome； differentially expressed gene 植物自交不親和反應(yīng)（ self-incompatibility， SI）能夠防止物種間由于近親繁殖而造成的物種退化，同時也為植物胞間信號傳導研究提供了理想的模式系統(tǒng)（ Pandey， 1980； Barrett， 1998； de Nettancourt， 2001） 。甘藍等蕓薹屬植物屬于典型的孢子體型自交不親和，其受單一的 S 位點控制，當自花授粉后，花粉中 S位點半胱氨酸富集蛋白（ SCR）與柱頭上 S位點受體激酶（ SRK）的胞外域結(jié)合，使其釋放原本結(jié)合在 SRK 激酶域的類硫氧還蛋白（ THL1/THL2）而激活 SRK，活化的SRK 磷酸化 ARC1，后者通過泛素化過程介導 Exo70A1 的降解， Exo70A1 的不斷被降解直接或間接導致水孔蛋白（ MOD）關(guān)閉，柱頭細胞表面缺水，花粉因缺少水分等物質(zhì)而不能正常萌發(fā)，從而實現(xiàn) SI 反應(yīng)。 而親和授粉后， 異花花粉卻能在柱頭上完成水化并萌發(fā) （ Kachroo et al.， 2001； Takayama et al.， 2001； Newbigin & Vierstra， 2003；李曉歡 等， 2015；朱利泉和周燕， 2015） 。突變或缺失SCR 和 SRK 都能導致自交不親和性徹底喪失，而反義抑制 ARC1 的表達和過量表達 Exo70A1 都只能部分打破自交不親和性，這表明 ARC1 和 Exo70A1 組成的通路可能只是 SRK 下游信號傳導途徑的一個分支，可能還存在其他的信號通路參與調(diào)控甘藍的自交不親和反應(yīng)（ Kitashiba et al.， 2011；Nasrallah & Nasrallah， 2014） 。目前的研究主要圍繞 ARC1 和 Exo70A1 組成的通路及作用機理上，對其他方面的研究還鮮有報道。轉(zhuǎn)錄組是細胞或組織在不同生命階段、不同生理狀態(tài)以及不同環(huán)境條件下轉(zhuǎn)錄出來的所有 RNA 的集合。近年來，高通量轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的發(fā)展和完善為不同生物功能基因組學的研究提供了新的方法和思路（ Fullwood et al.， 2009） 。目前，轉(zhuǎn)錄組測序在藥物開發(fā)、花發(fā)育和生物脅迫等方面已有一定的研究（ Colebatch et al.， 2002； Umezawa et al.， 2006； Valliyodan & Nguyen， 2006； Keurentjes & Fu， 2007； Severin et al.， 2010；劉洪博 等， 2017） 。本研究中利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析甘藍自花和異花授粉后的基因表達的差異，以期為甘藍自交不親和性相關(guān)基因更為廣泛的挖掘奠定基礎(chǔ)。 蒲 敏，廉小平，羅紹蘭，張賀翠，王玉奎，白曉璟，曾 靜，高啟國，任雪松，朱利泉 . 結(jié)球甘藍自花和異花授粉誘導的柱頭轉(zhuǎn)錄組分析 . 園藝學報， 2018， 45 (1)： 71 84. 73 1 材料與方法 1.1 試材及取樣 以西南大學十字花科蔬菜研究所選育的兩種甘藍自交不親和高代自交系 A4 和 F1 為材料，其中A4 為 S28 單倍型， F1 為 S7 單倍型，二者異交親和。 2016 年 4 月在開花前 1 2 d 將長勢相同的 A4花蕾人工去雄，分別用新鮮 A4 花粉和 F1 花粉同時給去雄的 A4 柱頭分別做自花授粉和異花授粉，30 min 后快速掃去柱頭上的花粉，取下整個花柱，以未授粉處理的柱頭為對照。上述樣品采集后立即放入液氮中，后置于 80 保存?zhèn)溆谩? 1.2 柱頭總 RNA 提取 參照植物總 RNA 提取試劑盒（ RNAprep Pure Plant Kit， TIANGEN）說明書提取甘藍柱頭樣品的總 RNA。用 1%的瓊脂糖凝膠電泳和 NanodropND-2000 分光光度計檢測 RNA 的完整度、純度（ OD260/OD280） 、 濃度、 核酸吸收峰是否正常； 經(jīng) Agilent Bioanalyzer 2100 system（ Agilent Technologies，CA， USA）精確檢測 RNA 的完整性，包括 RIN 值、 28S/18S、圖譜基線有無上抬和 5S 峰。 1.3 文庫構(gòu)建及轉(zhuǎn)錄組測序 文庫的構(gòu)建均由北京百邁克生物科技有限公司完成。用帶有 Oligo（ dT）的磁珠富集真核生物mRNA；加入裂解緩沖液將 mRNA 進行隨機打斷；以 mRNA 為模板，用六堿基隨機引物合成第 1條 cDNA 鏈， 然后加入緩沖液、 dNTPs、 RNase H 和 DNA 聚合酶合成第 2 條 cDNA 鏈， 利用 AMPure XP 珠子純化 cDNA；純化的雙鏈 cDNA 再進行末端修復、加 A 尾并連接測序接頭，然后用 AMPure XP 珠子進行片段大小選擇；最后通過 PCR 富集得到 cDNA 文庫。使用 Qubit2.0 進行初步定量，使用 Agilent 2100 對文庫的插入片段大小進行檢測。用 Q-PCR 方法對文庫有效濃度進行準確定量（有效濃度 > 2 nmol · L-1） 。庫檢合格后，在 Illumina HiSeq 2000 平臺進行雙端測序。 1.4 生物信息學分析 由轉(zhuǎn)錄組測序所得的數(shù)據(jù)為原始數(shù)據(jù)，對原始數(shù)據(jù)進行質(zhì)量控制，以確保這些讀取序列有足夠高的質(zhì)量，保證后續(xù)分析的準確性。去除含有接頭和低質(zhì)量的片段（ N 的比例大于 10%；去除質(zhì)量值 Q 10 的堿基數(shù)占整條片段的 50%以上的序列） 。經(jīng)過質(zhì)量控制之后得到的高質(zhì)量的有效數(shù)據(jù)，利用 TopHat2（ Kim et al.， 2013）將其與參考基因組進行序列比對，最多允許 5 個錯配。統(tǒng)計片段在參考序列上的分布情況及覆蓋度。采用 FPKM 計算基因表達量（ Florea et al.， 2013） ，計算得到的基因表達量可直接用于比較不同樣品間的基因差異表達。使用 EBSeq 進行差異表達分析，以差異倍數(shù) 2或 0.5 且錯誤發(fā)現(xiàn)率 FDR < 0.01 為篩選標準。 最后基于差異表達的基因進行 GO（ http： /www. geneontology.org）和 COG（ http： /www.ncbi.nlm.nih.gov/COG/）功能注釋和富集分析。 1.5 實時熒光定量 PCR 驗證 隨機挑選 10 個篩選出來的差異表達基因來驗證轉(zhuǎn)錄組測序的可靠性。設(shè)計特異引物（表 1） ，以同期樣品 RNA 逆轉(zhuǎn)錄得到的 cDNA 為模板，參照 SYBR®Premix Ex TapTM說明書，以 Actin3 為內(nèi)參，在 7500 型實時熒光定量 PCR 儀進行 PCR 擴增。反應(yīng)體系 20 L： 2× SYBR® Premix Ex TapTM10 L，引物各 1 L， cDNA 模板 1 L，加超純水至 20 L。擴增程序為 95 預變性 1 min； 95 15 s，60 15 s， 72 30 s，共 40 個循環(huán)。 Pu Min， Lian Xiaoping， Luo Shaolan， Zhang Hecui， Wang Yukui， Bai Xiaojing， Zeng Jing， Gao Qiguo， Ren Xuesong， Zhu Liquan. Transcriptome analysis of stigma after pollination in Brassica oleracea var. capitata. 74 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (1)： 71 84. 表 1 定量 PCR 引物表 Table 1 Primers used in RT-PCR 基因號 Gene ID 正向引物（ 5 3） Forward primer 反向引物（ 5 3） Reverse primer Bo8g044700 GTTGAAAGCTTTGATTTGTCTATG CTTTGTCCCGTATCCATTTGCTCC Bo7g077530 CACACAGCTTCTCTCTAACTTCTC CCACCATCGCAGAACTCAATCAAG Bo7g062200 GTGCTCAAGTTTGGGGAAGAAAC CGTGATCGAAGCCAAACTCTTCC Bo5g021500 CTTCCTACGTCGCCTTCACCGACA GACGACGATCATCGGCTTATCTCC Bo1g150050 CAACCCTTCCTGTATTCAGAGAAG GAGGTAAGGAAAAGTGGATTTAAT Bo00787s010 GTATCAAAGTTATTTTCTCTCT CGCCTAGATCGTCACGGCAATGT Bo8g098540 CCAACATCACTCCTTTTGACTCC GTTTGCTCGACCGGTCTTTGCTT Bo5g039520 CAATCTCCTTATGACCCTCCTCGG CTCCTCCGTCGCCTTTCGGCTCTT Bo3g088360 TCACAACCAAGCACGACAGGCAGTA TAACTATAACTACGCTTCGAACAC Bo3g044540 GAAACCCAAAGGCAGGAGAAAAG CGTCCCAGGAATGTACTTCTTGG Actin3 GGCTGATGGTGAAGATATTCA CAAGCACAATACCAGTAGTAC 2 結(jié)果與分析 2.1 測序數(shù)據(jù)整體評估及差異表達基因的篩選 通過轉(zhuǎn)錄組測序分析，共獲得 1.6 × 108對原始序列讀取片段，總堿基數(shù)為 2.38 × 1010bp，各樣品的有效數(shù)據(jù)均達到 7.31 Gb， Q30 堿基百分比都在 93.22%以上，可認為測序質(zhì)量可靠（表 2） 。 以未授粉樣品為對照，使用 EBSeq 進行差異表達分析，自花授粉后差異表達的基因有 2 900 個，上調(diào)、下調(diào)的基因數(shù)分別為 2 218 個和 682 個，異花授粉后有 2 328 個基因有差異表達，上調(diào)、下調(diào)的基因數(shù)分別為 1 943 個和 385 個，自花和異花授粉共有的差異基因 1 904 個，除此共有差異基因后，自花和異花分別各有差異基因 996 個和 424 個。 表 2 測序數(shù)據(jù)評估統(tǒng)計結(jié)果 Table 2 Statistical table of evaluating the sequencing data 樣品 Sample 總序列數(shù) Total reads 比對上序列 Mapped reads 比對上單一序列 Unique mapped reads 總堿基數(shù) Total base GC/% Q30/%數(shù)量 Number % 數(shù)量 Number % 對照 Control 52 890 388 37 520 822 70.94 36 448 265 68.91 7 876 313 518 46.83 93.31 自花授粉 Self-pollination 52 193 396 36 788 031 70.48 35 629 876 68.27 7 757 341 608 46.55 93.38 異花授粉 Cross-pollination 55 111 516 38 925 813 70.63 37 247 307 67.59 8 192 393 720 46.94 93.22 注： Q30/%指質(zhì)量值 30 的堿基所占的百分比。 Note： Q30 represents the proportion of the reads quality value greater than or equal to 30. 2.2 差異表達基因 GO 注釋分析 GO 總共有 3 個本體，分別描述基因的生物學過程，細胞組分和分子功能。對分別得到的自花授粉和異花授粉差異表達的 2 900 個和 2 328 個基因進行 GO 注釋分析。其中，自花授粉中有 2 738 個基因有 GO 功能注釋，異花授粉中有 2 213 個基因有 GO 功能注釋。在甘藍授粉處理后的所有差異表達基因中，描述生物學過程的有 20 類，描述細胞組分的有 16 類，描述分子功能的有 17 類（表 3） 。 在生物學過程功能類型中，主要為細胞過程和單一生物過程，在差異表達基因背景和全部基因背景下，自花授粉具有較大比例的差異基因是生物相和細胞殺傷，異花授粉較大比例差異的基因是生物相和信號傳遞；在細胞組分功能類型中，細胞和細胞組分所涉及的基因最多，但是在差異表達基因背景和全部基因背景下，自花授粉中具有最大比例差異的是胞外基質(zhì)部分和類核，異花授粉的則為胞外區(qū)域部分和類核；在分子生物學功能類型中，結(jié)合和催化活性所占的比例最大，但全基因背景下，自花授粉具有最大比例差異的是核酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性和鳥嘌呤核苷酸交換因子活性，異蒲 敏，廉小平，羅紹蘭，張賀翠，王玉奎，白曉璟，曾 靜，高啟國，任雪松，朱利泉 . 結(jié)球甘藍自花和異花授粉誘導的柱頭轉(zhuǎn)錄組分析 . 園藝學報， 2018， 45 (1)： 71 84. 75 花授粉具有最大比例差異的是結(jié)構(gòu)分子活性和營養(yǎng)庫活性。 表 3 差異表達基因 GO 注釋分類統(tǒng)計結(jié)果 Table 3 Classification cartogram of GO annotation about differentially expression genes 類別 Classification 功能分類 Functional classification 占總基因 /% Percentage of tatal genes 占差異基因 /% Percentage of differentially expression genes 自花授粉 Self-pollination 異花授粉 Cross-pollination生物學過程 Biological process 細胞進程 Cellular process 73.20 80.20 80.89 單一生物進程 Single organism process 69.97 79.80 80.30 代謝進程 Metabolic process 69.63 70.17 73.93 應(yīng)激反應(yīng) Response to stimulus 54.86 70.20 72.21 生物調(diào)節(jié) Biological regulation 46.69 64.24 62.81 發(fā)育進程 Developmental process 38.91 51.24 49.62 細胞組織部分或生物合成 Cellular component organization or biogenesis 37.44 46.90 46.59 多細胞進程 Multicellular organismal process 32.03 40.32 39.22 定位 Localization 31.85 44.92 44.24 繁殖進程 Reproductive process 24.35 32.18 30.82 有機體進程 Multi-organism process 20.64 34.44 35.20 信號傳導 Signaling 17.90 31.81 32.99 生長 Growth 11.59 20.12 19.57 免疫系統(tǒng)過程 Immune system process 10.52 18.99 20.79 繁殖 Reproduction 7.20 8.29 7.59 節(jié)律進程 Rhythmic process 1.49 1.86 1.85 生物黏附 Biological adhesion 0.86 0.66 0.81 生物相 Biological phase 0.41 0 0 細胞活動 Locomotion 0.33 0.88 0.50 細胞殺傷 Cell killing 0.06 0.11 0.02 細胞組分 Cellular component 細胞部分 Cell part 94.96 89.37 95.26 細胞 Cell 94.56 88.90 94.80 細胞器 Organelle 83.16 78.36 83.87 膜結(jié)構(gòu) Membrane 46.86 38.47 46.00 細胞器部分 Organelle part 25.16 27.42 25.21 胞外區(qū)域 Extracellular region 16.25 13.48 16.27 膜部分 Membrane part 16.98 12.97 16.18 細胞連接 Cell junction 16.47 12.92 16.81 復雜大分子 Macromolecular complex 8.22 12.73 8.99 膜關(guān)閉內(nèi)腔 Membrane-enclosed lumen 1.79 2.48 1.99 胞外區(qū)域部分 Extracellular region part 0.80 0.36 0.72 胞外基質(zhì) Extracellular matrix 0.51 0.24 0.45 擬核 Nucleoid 0.04 0.17 0.05 胞外基質(zhì)部分 Extracellular matrix par 0.11 0.06 0.09 病毒體 Virion 0 0.01 0 病毒體部分 Virion part 0 0.01 0 分子功能 結(jié)合活性 Binding 57.20 53.09 59.38 Molecular 催化活性 Catalytic activity 46.38 45.10 47.36 function 核苷酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性 Nucleic acid binding transcription factor activity 13.15 7.75 13.42 轉(zhuǎn)運活性 Transporter activity 7.45 6.55 6.78 分子轉(zhuǎn)導活性 Molecular transducer activity 4.16 2.77 4.11 結(jié)構(gòu)分子活性 Structural molecule activity 1.06 2.50 1.13 酶調(diào)節(jié)活性 Enzyme regulator activity 2.89 2.01 2.71 電子載體活性 Electron carrier activity 2.08 1.92 2.08 受體活性 Receptor activity 2.08 1.70 2.12 抗氧化活性 Antioxidant activity 0.51 0.70 0.77 結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄活性 Protein binding transcription factor activity 0.58 0.44 0.68 營養(yǎng)貯存活性 Nutrient reservoir activity 0.26 0.22 0.32 鳥嘌呤核苷酸交換因子活性 Guanyl-nucleotide exchange factor activity 0.07 0.14 0.05 金屬伴侶蛋白活性 Metallochaperone activity 0 0.05 0.05 翻譯調(diào)控活性 Translation regulator activity 0 0.04 0 蛋白標簽 Protein tag 0 0.03 0 通道調(diào)節(jié)活性 Channel regulator activity 0.04 0.02 0 Pu Min， Lian Xiaoping， Luo Shaolan， Zhang Hecui， Wang Yukui， Bai Xiaojing， Zeng Jing， Gao Qiguo， Ren Xuesong， Zhu Liquan. Transcriptome analysis of stigma after pollination in Brassica oleracea var. capitata. 76 Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (1)： 71 84. 2.3 GO 功能的顯著性富集分析 為進一步研究甘藍柱頭經(jīng)自花和異花授粉后與未授粉對照的差異，通過 FDR < 0.01 篩選出極顯著的 GO 條目，自花授粉和異花授粉分別具有 195 個和 208 個極顯著的富集條目，共有 155 個極顯著的富集條目。 自花授粉處理后特有 40 個極顯著的富集條目 （表 4） ， 主要涉及糖跨膜轉(zhuǎn)運活性 （ GO：051119） 、微管結(jié)合（ GO： 0015631）和鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶活性（ GO： 0004683）等。異花授粉特有 53 個極顯著的富集條目（表 5） ，主要涉及法尼酸 O甲基轉(zhuǎn)移酶的活性（ GO： 0019010） 、微管負向運動（ GO： 0008569）和生長素跨膜運輸（ GO： 0010328）等。 表 4 自花授粉處理后特有的極顯著 GO 富集 Table 4 Highly significant GO terms in cross-pollination particularly GO 條目 GO term 注釋描述 Annotation description 基因數(shù) Gene number GO： 0052639 葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性 Salicylic acid glucosyltransferase activity 2 GO： 0015140 蘋果酸鈉跨膜轉(zhuǎn)運活性 Malate transmembrane transporter activity 1 GO： 0015631 微管蛋白結(jié)合 Tubulin binding 11 GO： 0052641 安息香酸葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性 Benzoic acid glucosyltransferase activity 2 GO： 0016762 木葡聚糖轉(zhuǎn)移酶活性 Xyloglucan： xyloglucosyl transferase activity 11 GO： 0008171 O甲基轉(zhuǎn)移酶活性 O-methyltransferase activity 12 GO： 0080044 槲皮素 7 O葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性 Quercetin 7-O-glucosyltransferase activity 10 GO： 0033946 木葡聚糖酶活性 Xyloglucan-specific endo-beta-1,4-glucanase activity 9 GO： 0008517 葉酸轉(zhuǎn)運體活性 Folic acid transporter activity 1 GO： 0052638 3 吲哚丁酸葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性 Indole-3-butyrate beta-glucosyltransferase activity 3 GO： 0030660 高爾基囊膜 Golgi-associated vesicle membrane 1 GO： 0016328 原生質(zhì)側(cè)膜 Lateral plasma membrane 4 GO： 0005762 線粒體大亞基 Mitochondrial large ribosomal subunit 1 GO： 0030093 葉綠體光系統(tǒng) Chloroplast photosystem 1 GO： 0015369 鈣：質(zhì)子逆向轉(zhuǎn)運蛋白活性 Calcium： proton antiporter activity 2 GO： 0019208 磷酸酶調(diào)節(jié)活性 Phosphatase regulator activity 3 GO： 0051765 肌醇四磷酸激酶活性 Inositol tetrakisphosphate kinase activity 1 GO： 0005759 線粒體基質(zhì) Mitochondrial matrix 6 GO： 0042409 咖啡酰輔酶 A O甲基轉(zhuǎn)移酶活性 Caffeoyl-CoA O-methyltransferase activity 1 GO： 0042777 質(zhì)膜 ATP 合成偶聯(lián)質(zhì)子轉(zhuǎn)運 Plasma membrane ATP synthesis coupled proton transport 1 GO： 0052640 水楊酸葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性 Salicylic acid glucosyltransferase activity 2 GO： 0051119 糖跨膜轉(zhuǎn)運活性 Sugar transmembrane transporter activity 16 GO： 0046870 鎘離子結(jié)合 Cadmium ion binding 7 GO： 0004698 鈣依賴性蛋白激酶 C 活性 Calcium-dependent protein kinase C activity 9 GO： 000468</p>
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