海城地區(qū)溫室蔬菜灰霉病菌對6種藥劑的抗藥性檢測

<p>遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019( 1) : 42 44Liaoning Agricultural Sciences文章編號 : 1002 1728( 2019) 01 0042 03 doi: 103969/j issn1002 1728201901010海城地區(qū)溫室蔬菜灰霉病菌對6種藥劑的抗藥性檢測*趙 楊 ， 孫柏欣 ， 陳 樂 ， 苗則彥( 遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 /遼寧省農(nóng)作物有害生物控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ， 遼寧 沈陽 110161)摘要 : 采用菌絲生長速率法 ， 對遼寧省海城地區(qū)溫室蔬菜灰霉病菌進(jìn)行 6 種藥劑抗藥性檢測 。結(jié)果表明 ， 灰霉病菌對嘧霉胺表現(xiàn)高抗 ， 建議生產(chǎn)上暫停使用 ; 對腐霉利 、啶酰菌胺 、咯菌腈的 EC50最高值及平均值較已報道數(shù)值均有提高 ， 應(yīng)加強(qiáng)抗藥檢測及治理 。對氟啶胺和氟吡菌酰胺的 EC50范圍分別為 0 013 0 066 g/ml 和0027 5434 g/ml， 平均 EC50分別為 0035 g/ml 和 0 963 g/ml， 對氟啶胺和氟吡菌酰胺均表現(xiàn)敏感 ， 可做為主要防治藥劑科學(xué)使用 。關(guān)鍵詞 : 灰霉病菌 ( Botrytis cinerea) ; 抗藥性檢測 ; 毒力測定中圖分類號 : S4364121+3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 : B由灰葡萄孢 ( Botrytis cinerea Pers ) 引起的灰霉病 ， 是溫室蔬菜的重要病害之一 ， 病原菌寄主多達(dá) 230 余種 ， 可侵染莖 、葉 、花和果實(shí) ， 為害十分嚴(yán)重 ， 生產(chǎn)上主要以化學(xué)藥劑防治為主 。由于該病原菌具有高度異質(zhì)性 ， 變異速度快 ， 因此 ， 極易產(chǎn)生抗藥性 。遼寧沈陽 、大連 、鞍山等地區(qū)菌株對嘧霉胺表現(xiàn)高抗 1。研究發(fā)現(xiàn) ， 2017 年遼寧省內(nèi)番茄灰霉病菌對腐霉利抗藥性呈加重趨勢 ， 中抗菌株占主體地位 ， 且在部分地區(qū)發(fā)現(xiàn)高抗菌株 2。武漢地區(qū)出現(xiàn)抗啶酰菌胺菌株 ， 山東地區(qū)出現(xiàn)中抗啶酰菌胺菌株 ， 但遼寧菌株對啶酰菌胺表現(xiàn)敏感 3 5。山東地區(qū)已出現(xiàn)低抗咯菌腈菌株 ， 遼寧地區(qū)菌株對咯菌腈表現(xiàn)敏感 6 7。目前 ， 氟啶胺是國際上防治灰霉病的主要藥劑之一 ，中國主要登記根腫病 、晚疫病及早疫病等病害防治 ， 尚未在灰霉病上登記 。山東省 、河北省和福建省已建立灰葡萄孢對氟啶胺的敏感基線 ， 且相繼報道氟啶胺與嘧霉胺 、多菌靈 、異菌脲 、乙霉威 、啶酰菌胺 、腐霉利 、啶氧菌酯之間不存在交互抗性 8 9。2017 年上海地區(qū)的 20%番茄灰霉病菌菌株對氟吡菌酰胺表現(xiàn)高抗 10。遼寧省海城地區(qū)溫室蔬菜種植時間長 ， 面積逐年增加 ， 一些藥劑常年使用 ， 防效逐年下降 ， 因此 ， 抗藥性檢測十分必要 。明確灰霉病菌對幾種藥劑的抗性水平 ， 為更有效地指導(dǎo)田間灰霉病防治提供理論依據(jù) 。1 材料與方法1. 1 試驗(yàn)材料1. 1. 1 供試菌株2017 2018 年從遼寧海城地區(qū)溫香鎮(zhèn) 、望臺鎮(zhèn) 、耿莊鎮(zhèn) 、騰鰲鎮(zhèn)采集溫室蔬菜灰霉病病樣 ， 分離純化后于 4 低溫保存?zhèn)溆?。1. 1. 2 供試藥劑及培養(yǎng)基982%嘧霉胺原藥 ， 昆山瑞澤農(nóng)藥股份有限公司 ;93%腐霉利原藥 ， 連云港優(yōu)士化學(xué)品有限公司 ; 97% 咯菌腈原藥 ， 山東奧得利化工有限公司 ; 98% 氟啶胺原藥 ， 山東申達(dá)作物科技有限公司 ; 98% 啶酰菌胺原藥 ， 河北美星化工有限公司 ; 417% 氟吡菌酰胺德國拜耳作物科學(xué)公司 。除嘧霉胺試驗(yàn)用 L-asp 培養(yǎng)基外 ， 其他藥劑試驗(yàn)均用PDA 培養(yǎng)基 。1. 2 試驗(yàn)方法1. 2. 1 室內(nèi)毒力測定方法采用菌絲生長速率法 。將原藥溶于少量丙酮 ， 用無菌水配成濃度為 100 g/ml 的母液 ， 再用無菌水稀釋成系列濃度的藥液 ， 制備藥劑質(zhì)量濃度分別為嘧霉胺 ( 3 500、7000、14 000、28 000、56 000、112 000 g/ml) ; 腐霉利( 00064、0032、0 160、0 800、4 000、20 000 g/ml) ; 啶酰菌胺 ( 1 600、2 400、3 600、5 400、8 100、12 150 g/ml) ; 咯菌腈 ( 0 080、0 208、0 541、1 406、3 656、9 505g/ml) ; 氟啶胺 : ( 0 011、0 019、0 034、0062、0 111 和* 收稿日期 : 2018 12 21基金項(xiàng)目 : 遼寧省村級綜合服務(wù)平臺建設(shè)項(xiàng)目作者簡介 : 趙楊 ( 1983 ) 男 ， 遼寧省沈陽人 ， 助理研究員 ， 主要從事蔬菜病害防治研究 。E-mail: 15940065218126 com通訊作者 : 苗則彥 ( 1968 ) ， 女 ， 研究員 ， 主要從事蔬菜病害研究 。E-mail: mzyln aliyun com第 1 期 趙 楊等 : 海城地區(qū)溫室蔬菜灰霉病菌對 6 種藥劑的抗藥性檢測0200 g/ml) ; 氟吡菌酰胺 ( 0 012、0 047、0 188、0 750、3 000 和 12 000 g/ml) 的含藥平板 。將病原菌分別在PDA 平板上培養(yǎng) 3 d 后 ， 沿菌落邊緣打取直徑為 5 mm 的菌餅 ， 菌絲面朝下接種于配制的含藥平板中央 ， 每皿 1 個菌餅 ， 以不加藥的平板為對照 ， 每處理 4 次重復(fù) ， 25 培養(yǎng) 3 d， 用十字交叉法測量菌落直徑 ， 根據(jù)各處理的平均菌落直徑凈增長值 ， 利用 DPS 軟件求出各種藥劑對各菌株的毒力回歸方程和 EC50。1. 2. 2 抗性水平測定嘧霉胺敏感性基線為 0 0911 g/ml 11; 腐霉利敏感性基線為 ( 031 ±0 08) g/ml 12; 啶酰菌胺敏感性基線為 ( 1 9731 ± 1 0011) g/ml 5; 咯菌腈敏感性基線為( 00073 ± 0 0454) g/ml 7; 氟啶胺敏感性基線為( 00221 ± 0 0098) g/ml 9; 氟吡菌酰胺敏感性基線為( 194 ±155) g/ml 13?？剐运?= 供試菌株 EC50值 /敏感性基線抗性水平 5 為敏感菌株 ; 5 抗性水平 10 為低抗菌株 ; 10 抗性水平 40 為中抗菌株 ; 抗性水平 40 為高抗菌株 1。2 結(jié)果與分析灰霉病菌對嘧霉胺的 EC50范圍為 10 044 79 398g/ml， 平均 EC50為 31 523 g/ml， 全部樣品對嘧霉胺均表現(xiàn)高抗 。2014 年鞍山地區(qū) ( 海城 、臺安 、岫巖 ) 番茄灰霉病菌對嘧霉胺的 EC50值為 25 481 39 613 g/ml、平均EC50值為 33 057 g/ml， 目前 ， 樣品的最高 EC50值提高200倍 ， EC50平均值提高 0 95 倍 1。4 個樣品對腐霉利抗藥性表現(xiàn)敏感其余為低抗和中抗 ， EC50范圍為 0305 12208 g/ml， 平均 EC50為 4 180 g/ml。2014 年鞍山地區(qū)番茄灰霉病菌對腐霉利的 EC50值為 1 237 3 89 g/ml、EC50平均值為 2903 g/ml， 目前 ， 樣品的最高 EC50值提高 3 138 倍 ， EC50平均值提高 1 44 倍 1。6 個樣品對啶酰菌胺表現(xiàn)為低抗其余為敏感 ， EC50范圍為 5 227 13353 g/ml， 平均 EC50為 8 87 g/ml， 2015 年鞍山地區(qū)番茄灰霉病菌對啶酰菌胺的 EC50值為 12785 3 0818g/ml， EC50平均值為 1 9305 g/ml， 目前 ， 樣品的最低EC50值升高 4 09 倍 ， 最高 EC50值升高 4 33 倍 ， EC50平均值升高 460 倍 5。6 個樣品對咯菌腈抗藥性表現(xiàn)敏感其余為低抗和中抗 ， EC50范圍為 0 002 0 155 g/ml， 平均EC50為 0 056 g/ml， 2014 年海城地區(qū)病菌對咯菌腈的EC50值為 0 0016 0 0244 g/ml、平均 EC50值為 0 009g/ml， 未出現(xiàn)抗性菌株 7。近幾年 ， 隨著咯菌腈在海城地區(qū)的大面積使用 ， 目前樣品的最高 EC50值提高 6 35倍 ， 平均值提高 622 倍 ; 病菌對氟啶胺表現(xiàn)敏感 ， EC50范圍為 0 013 0 066 g/ml， 平均 EC50為 0 035 g/ml; 病菌對氟吡菌酰胺表現(xiàn)敏感 ， EC50范圍為 0027 5434 g/ml， 平均 EC50為 0963 g/ml( 見表 1) 。表 1 海城地區(qū)溫室灰霉病菌對藥劑的敏感性編號 地點(diǎn)嘧霉胺 腐霉利毒力方程EC50抗性評價毒力方程EC50抗性評價1 溫香鎮(zhèn)東高村 Y = 2029 +1721x 15092 H Y = 0429 +0529x 6481 M2 溫香鎮(zhèn)東高村 Y = 1906 +1059x 63202 H Y = 0594 +1382x 2694 L3 溫香鎮(zhèn)達(dá)連村 Y = 1591 +1114 x 26782 H Y = 1425 +1588x 7897 L4 望臺鎮(zhèn)邢家村 Y = 1681 +1093x 34543 H Y = 1319 +1318x 10024 M5 望臺鎮(zhèn)邢家村 Y = 1587 +1125x 25717 H Y = 0195 +1171x 1467 S6 望臺鎮(zhèn)官草村 Y = 2031 +1338x 32987 H Y = 0314 +1319x 1729 L7 望臺鎮(zhèn)官草村 Y = 2541 +1613x 37608 H Y = 1250 +1438x 7401 M8 望臺鎮(zhèn)前望臺村 Y = 1778 +1391x 18974 H Y = 0464 +1406x 2140 L9 望臺鎮(zhèn)前望臺村 Y = 1260 +1210x 10997 H Y =0385 +0746x 0305 S10 望臺鎮(zhèn)道沿村 Y = 1167 +1165x 10044 H Y = 0194 +0775x 1781 L11 耿莊鎮(zhèn)古城村 Y = 1182 +1109x 11635 H Y = 0066 +1027x 1159 S12 耿莊鎮(zhèn)古城村 Y = 2371 +1712x 24258 H Y =0359 +0697x 0305 S13 耿莊鎮(zhèn)北耿村 Y = 1480 +0871x 50081 H Y = 1683 +1549x 12208 M14 騰鰲鎮(zhèn)東新村 Y = 2435 +1281x 79398 H Y = 0509 +1089x 2933 L啶酰菌胺 咯菌腈1 溫香鎮(zhèn)東高村 Y = 0549 +0765x 5227 S Y =0461 +0231x 0010 S2 溫香鎮(zhèn)東高村 Y = 0761 +0941x 6440 S Y =0417 +0362x 0070 S3 溫香鎮(zhèn)達(dá)連村 Y = 1248 +1143x 12356 L Y =0383 +0332x 0070 S4 望臺鎮(zhèn)邢家村 Y = 0763 +0944x 6425 S Y =0428 +0162x 0002 S5 望臺鎮(zhèn)邢家村 Y = 0656 +0852x 5892 S Y =0296 +0330x 0127 L6 望臺鎮(zhèn)官草村 Y = 1013 +0997x 10363 L Y =0380 +0339x 0075 S7 望臺鎮(zhèn)官草村 Y = 0757 +0903x 6880 S Y =0520 +0405x 0052 S·34·遼 寧 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2019 年編號 地點(diǎn)嘧霉胺 腐霉利毒力方程EC50抗性評價毒力方程EC50抗性評價8 望臺鎮(zhèn)前望臺村 Y = 1002 +0979x 10564 L Y =1176 +0655x 0016 S9 望臺鎮(zhèn)前望臺村 Y = 1148 +1020x 13353 L Y =0385 +0313x 0072 S10 望臺鎮(zhèn)道沿村 Y = 0909 +0925x 9607 S Y =0360 +0171x 0008 S11 耿莊鎮(zhèn)古城村 Y = 1035 +1035x 10000 L Y =0244 +0301x 0155 L12 耿莊鎮(zhèn)古城村 Y = 1311 +1168x 13232 L Y =0699 +0281x 0003 S13 耿莊鎮(zhèn)北耿村 Y = 0798 +0935x 7124 S Y =0757 +0457x 0022 S14 騰鰲鎮(zhèn)東新村 Y = 0794 +0960x 6727 S Y =0409 +0415x 0104 S氟啶胺 氟吡菌酰胺1 溫香鎮(zhèn)東高村 Y =1648 +1266x 0050 S Y =0365 +0497x 0185 S2 溫香鎮(zhèn)東高村 Y =2112 +1393x 0031 S Y =0023 +0690x 0927 S3 溫香鎮(zhèn)達(dá)連村 Y =1844 +0980x 0013 S Y = 0876 +0839x 1272 S4 望臺鎮(zhèn)邢家村 Y =1930 +1347x 0037 S Y =0176 +0800x 0601 S5 望臺鎮(zhèn)邢家村 Y =1711 +1138x 0031 S Y =0431 +0854x 0313 S6 望臺鎮(zhèn)官草村 Y =2044 +1401x 0035 S Y =0048 +0668x 0848 S7 望臺鎮(zhèn)官草村 Y =2626 +2048x 0052 S Y =0313 +0436x 0192 S8 望臺鎮(zhèn)前望臺村 Y =2349 +1464x 0025 S Y =0020 +0689x 0937 S9 望臺鎮(zhèn)前望臺村 Y =2425 +2051x 0066 S Y =0051 +0941x 0883 S10 望臺鎮(zhèn)道沿村 Y =1978 +1154x 0019 S Y =0198 +0845x 0584 S11 耿莊鎮(zhèn)古城村 Y =2476 +1823x 0044 S Y =0339 +0847x 0398 S12 耿莊鎮(zhèn)古城村 Y =2081 +1408x 0033 S Y = 0167 +0228x 5434 S13 耿莊鎮(zhèn)北耿村 Y =2250 +1502x 0032 S Y =0420 +0268x 0027 S14 騰鰲鎮(zhèn)東新村 Y =2093 +1320x 0026 S Y =0022 +0400x 0878 S注 : S 敏感菌株 ; L 低抗菌株 ; M 中抗菌株 ; H 高抗菌株3 結(jié)論與討論海城溫室蔬菜灰霉病菌對嘧霉胺表現(xiàn)高抗藥性 ， 建議在生產(chǎn)上暫停使用 ， 同紀(jì)明山研究結(jié)果一致 1; 海城灰霉病菌對腐霉利的抗性水平升高 ， 應(yīng)加強(qiáng)抗藥性檢測和并注意藥劑輪換使用 ， 延緩病菌的抗藥性產(chǎn)生 ; 病原菌對啶酰菌胺的敏感性降低而抗性提高 ， 啶酰菌胺可在海城使用 ， 但應(yīng)適時進(jìn)行抗藥性檢測 ， 注意藥劑的合理輪換 。海城地區(qū)灰霉病菌對咯菌腈的敏感性降低 ， 出現(xiàn)低抗和中抗菌株 ， 應(yīng)引起廣泛注意 ， 加強(qiáng)藥劑的科學(xué)使用并及時進(jìn)行抗藥性檢測 。氟啶胺對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制作用強(qiáng)于嘧霉胺 、腐霉利 、啶酰菌胺 ， 且與上述殺菌劑不存在交互抗性 ， 應(yīng)進(jìn)一步明確田間使用量 、田間防效 、安全性等問題 ， 為其用于灰霉病防治提供理論基礎(chǔ) 8 9。氟吡菌酰胺近幾年開始在海城推廣使用 ， 以 42 8% 氟菌·肟菌酯懸浮劑 ( 214%氟吡菌酰胺 +21 4% 肟菌酯 ) 為代表 ， 主要用于溫室蔬菜白粉 、葉霉 、炭疽和靶斑等葉部病害防治 ， 調(diào)查發(fā)現(xiàn)該藥劑使用地區(qū)范圍廣 、應(yīng)用作物種類多 、使用頻率高 ， 應(yīng)加強(qiáng)抗藥性檢測 、密切關(guān)注抗藥性產(chǎn)生情況 。參考文獻(xiàn) : 1 紀(jì)明山 ， 劉妍 ， 朱赫 ， 等 遼寧省番茄灰霉病菌對常用殺菌劑的抗藥性監(jiān)測與交互抗藥性 J 農(nóng)藥 ， 2017， 56( 9) : 676 678 2 杜穎 ， 付丹妮 ， 鄒益澤 ， 等 2017 年遼寧省番茄灰霉病菌對腐霉利的抗藥性現(xiàn)狀及機(jī)制研究 J 中國蔬菜 ， 2018( 1) :58 65 3 范飛 ， 李娜 ， 李國慶 ， 等 湖北省草莓保護(hù)地灰霉病菌的抗藥性研究 C 中國植物病理學(xué)會 2016 年學(xué)術(shù)年會論文集 4 徐大同 山東地區(qū)灰霉病菌對常用殺菌劑的抗性檢測及對氟菌唑和氟啶胺的敏感性 D 泰安 : 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) ， 2015 5 Yan LIU， Zhiqiu QI， BaoYan HAN， et al Baseline Sensitivi-tYof Botrytis cinerea from Liaoning Province to Boscalid J Agricultural Science Technology， 2015， 16( 11) : 2531 2534 6 劉超 果蔬灰霉病的抗藥性檢測及其生防菌的分離 D 濟(jì)寧 : 曲阜師范大學(xué) ， 2014 7 王智 ， 朱赫 ， 祁之秋 ， 等 遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性植物保護(hù) J 2016， 42( 5) : 214 216 8 陳治芳 ， 王文橋 ， 韓秀英 ， 等 灰葡萄孢 ( Botrytis cinerea)對氟啶胺的敏感基線及對不同殺菌劑的交互抗性 J 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 ， 2011， 34( 3) : 33 36 9 石妞妞 ， 杜宜新 ， 阮宏椿 ， 等 福建省番茄灰霉病菌對氟啶胺敏感基線建立及與不同殺菌劑的交互抗性 J 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報 ， 2016， 18( 4) : 535 539 10 武文帥 ， 胡志宏 ， 劉鵬飛 ， 等 上海地區(qū)番茄灰霉病菌對幾種重要?dú)⒕鷦┑目顾幮詸z測 C 中國植物病理學(xué)會 2017年學(xué)術(shù)年會論文集 11 紀(jì)明山 ， 祁之秋 ， 趙平 ， 等 番茄灰霉病菌對嘧霉胺抗藥性的試驗(yàn) J 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 ， 2002， 33( 5) : 345 347 12 宋晰 ， 肖露 ， 劉西莉 ， 等 番茄灰霉病菌對腐霉利的抗藥性檢測及生物學(xué)性狀研究 J 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報 ， 2013， 15( 4) :398 404 13 張曉柯 ， 韓絮 ， 馬薇薇 ， 等 江蘇省草莓灰霉病菌對氟吡菌酰胺敏感性基線的建立及抗性風(fēng)險評估 J 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 ， 2015， 38( 5) : 810 815·44·</p>