木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果.pdf

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)Acta Agriculturae Zhejiangensis 6 z ny b cn 朱森林 王丹媚 唐秀梅 等 木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果 J 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 6 DO 6 issn 6 收稿日期 6 基金項(xiàng)目 國家自然科學(xué)基金 6 浙江省公益研究計(jì)劃 GN C 6 GN C 作者簡介 朱森林 6 男 浙江義烏人 學(xué)士 講師 主要從事植物生理與食品營養(yǎng)研究 m i z usen in6 6 com 通信作者 羅軍 m i qq com 木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果 朱森林 王丹媚 唐秀梅 陳 瑞 楊 蓉 徐月妹 金璐懿 任晴雯 劉 鵬 羅 軍 金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院 浙江金華 浙江師范大學(xué)植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室 浙江金華 廣西壯族自治區(qū) 農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所 廣西南寧 摘 要 為提高木霉水分散粒劑的產(chǎn)量 并探明木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病的防治效果 本研究對菌株的 培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化 結(jié)果表明 在本研究范圍內(nèi) 哈茨木霉 水分散粒劑中助劑的最佳配方 質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為 炭黑 磷酸鉀 羧甲基纖維素 可溶性淀粉 硅藻土 和木質(zhì)素磺酸鈉 深綠木霉 水分散粒劑中助劑的最佳配方 質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為 炭黑 羧甲基纖維素鈉 聚乙烯基吡咯烷酮 P P 可溶性淀粉 高嶺土 和木質(zhì)素磺酸鈉 以黃瓜品種津研 號為試驗(yàn)材料 探究深綠木 霉 Trichoderma atroviride 和哈茨木霉 Trichoderma harzianum 對感染尖孢鐮刀菌 Fusarium oxysporum 黃瓜 生理特性的影響 以僅接種病原菌的處理組作為對照 種木霉菌與黃瓜枯萎病原菌同時(shí)接種或單一接種均 可以顯著提高黃瓜抗氧化酶活性 脯氨酸含量和葉綠素含量 均可以顯著降低丙二醛含量 種木霉水分散 粒劑與黃瓜枯萎病菌共同接種的防治效果均達(dá)到了治理黃瓜枯萎病的目的 其中 深綠木霉的防效最佳 關(guān)鍵詞 黃瓜枯萎病 木霉菌 水分散粒劑 生物防治 中圖分類號 S 6 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 文章編號 6 Optimization of culture conditions of Trichoderma water dispersing granule and its biocontrol effects on cucumber fusarium wilt Z U Sen in W NG D nmei T NG Xiumei C N Rui Y NG Rong XU Yuemei J N uyi R N Qing en U Peng UO Jun Agricultural and Bioengineering Institute Jinhua Polytechnic Jinhua 321007 China Key Laboratory of Bot any Zhejiang Normal University Jinhua 321004 China Cash Crops Research Institute Guangxi Academy of Agricultural Sciences Nanning 530007 China Abstract n o de o im ove e yie d o Trichoderma e dis e sing g nu e nd s udy e biocon o e ec s o Trichoderma e dis e sing g nu e on Cucumbe Fus ium i e nu i ion condi ions o e s in e e o i mized T e esu s s o ed i in e sco e o is s udy e bes o mu ion m ss c ion o e d uv n in e e dis e sib e g nu e o Trichoderma harzianum s c bon b ck PO c bo yme y ce u ose so ub e s c i o i nd sodium ignosu on e T e o imum o mu ion m ss c ion o e d uv n in e e dis e sib e g nu e o Trichoderma viride s c bon b ck C C N P P so ub e s c k o in nd sodium ignosu on e ec s o Trichoderma atrovide nd Trichoderma harzianum on e ysio ogic c c e is ics o cucumbe Jiny n in ec ed i Fusarium oxyspo rum e e s udied Com ed i e e men g ou on y inocu ed i ogens bo Trichoderma nd Fusari um i ogens inocu ed e s me ime o sing e inocu ion cou d signi ic n y im ove e c ivi ies o n io id n enzymes o ine con en nd c o o y con en o cucumbe nd educe D con en Bo Trichoderma s ecies e dis e sing g nu e s o ed good biocon o e ec s nd e ec o Trichoderma atrovide s be e Key words cucumbe us ium i Trichoderma e dis e sib e g nu e bio ogy con o 黃瓜 Cucumis sativus 是葫蘆科 Cucu bi ce e 黃瓜屬 Cueumis 植物 具有較高的經(jīng)濟(jì) 醫(yī)藥與營養(yǎng)價(jià)值 黃瓜枯萎病是由尖孢鐮刀 菌 Fusarium oxysporum 引起的一種嚴(yán)重真菌土 傳病害 目前的防控措施多樣 但效果均不 夠理想 存在藥劑持效期短 易殘留 破壞土壤微 生物區(qū)系和污染環(huán)境等一系列問題 因此 開展 生物防治顯得尤為重要 木霉菌 Trichoderma 是一類環(huán)境友好型生防真菌 其適應(yīng)范圍廣 生 長繁殖速度快 可用來防治部分植物土傳病 害 因此 探討木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病 的防治效果 對黃瓜的安全生產(chǎn)和土傳病害的生 物防治具有重要意義 國內(nèi)外的許多關(guān)于木霉 菌劑的報(bào)道指出 木霉菌不僅能夠拮抗土壤中多 數(shù)病原真菌 而且可以顯著優(yōu)化植株品質(zhì) 也 有研究表明 添加木霉菌可以提高根際不同微生 物的相對豐度和多樣性 其對土著微生物群落的 調(diào)控過程同樣有助于拮抗土傳病原真菌 6 如茶 樹病害 等 且有利于土壤養(yǎng)分改善和植物生 長 牛鑫斌等 明確提出長枝木霉 Tri choderma longibrachiatum T6水分散粒劑對黃瓜 白粉病 黃瓜立枯病 Cucumbe d m ing o dis e se 和油菜 Brassica napus 根腐病 oo o 均具有較好的應(yīng)用成效 木霉菌制劑現(xiàn)已開始 在市面上流通 如美國的To s ie d 哈茨木霉 T 和以色列的T ic ode 哈茨木霉T 以 及日本的防治煙草白絹病木霉菌劑 浙江大學(xué) 等研制的木霉菌制劑對根腐病的防效達(dá)到 增產(chǎn)幅度為 目前雖然已經(jīng)開展 了木霉菌株對黃瓜枯萎病的拮抗作用相關(guān)研 究 6 但目前對木霉制劑的探究以可濕性粉 劑為主 關(guān)于木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病 的防治效果還未見報(bào)道 本研究通過測定相關(guān) 生理指標(biāo) 以探討木霉水分散粒劑的促生防病效 果 揭示木霉水分散粒劑的最優(yōu)固體基質(zhì)比例和 母藥助劑的最佳配比 研制出應(yīng)用效果良好的水 分散粒劑 為后期木霉菌劑的開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué) 依據(jù) 為黃瓜設(shè)施優(yōu)質(zhì)栽培奠定基礎(chǔ) 材料與方法 試驗(yàn)材料 供試黃瓜品種為津研 號 種子由河北省滄 州市百盛種業(yè)有限公司提供 供試培養(yǎng)基為馬 鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 PD 供試菌株來自 于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心的深綠木霉 Trichoderma atroviride菌株編號 CCC 哈 茨木霉 Trichoderma harzianum菌株編號 CCC 和尖孢鐮刀菌 Fusarium oxysporum 菌株編號 CCC 木霉水分散粒劑的研制 主要參考 i by等 的方法 木霉固體培 養(yǎng)基基質(zhì)的優(yōu)化 設(shè)置草炭 蛭石 牛糞質(zhì)量比分 別為 進(jìn)行條件優(yōu)化 木霉母藥助劑的篩選 通過測定不同助劑條件下 木霉的產(chǎn)孢量 篩選出最佳紫外保護(hù)劑 穩(wěn)定劑 黏結(jié)劑 崩解劑 載體和濕潤劑及其比例 擠壓造 粒 得到木霉水分散粒劑 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)于 年 月至 年6月在金華職 業(yè)技術(shù)學(xué)院植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行 將黃瓜種子 置于燒杯中充分吸水 播種前取種子在 O 中浸泡 min進(jìn)行表面消毒 然后用蒸餾 水洗凈藥液 在 條件下水浴浸種 浸種時(shí)不 斷攪拌 持續(xù) min 使種子吸水膨脹 供給種子 萌發(fā)所需基本水量 并起到種子表面消毒的作 用 取出后于 恒溫箱中黑暗催芽 當(dāng)黃瓜 苗長出 個(gè)真葉時(shí) 選取生長健壯 長勢一致 的黃瓜幼苗 栽培于學(xué)校植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室 接種 前 用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為 的高錳酸鉀溶液對所 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 第 卷 第6期 用花盆進(jìn)行消毒 試驗(yàn)設(shè) 個(gè)處理 接種哈茨木 霉水分散粒劑 T 接種深綠木霉水分散粒劑 T 接種哈茨木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌 T B 接種深綠木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌 T B 接種尖孢鐮刀菌 B 接種多菌靈和尖孢 鐮刀菌 CB 無菌水對照組 P 接種處理采用 層施法 施接種菌劑 g 盆 每處理重復(fù) 次 每盆種植黃瓜幼苗 株 每處理共種植黃瓜 株 指標(biāo)測定方法 在試驗(yàn)進(jìn)行的第 和 天 用打孔器取 相同質(zhì)量的幼苗中上部葉片作為樣品 將采集的 樣品放入液氮中保存 進(jìn)行相關(guān)生理指標(biāo)的測 定 葉綠素含量測定采用丙酮乙醇法 用硫 代巴比妥酸法檢測丙二醛 D 含量 茚三 酮顯色法測定脯氨酸含量 NBT光化還原法 測定超氧化物歧化酶 SOD 活性 愈創(chuàng)木酚 法測定過氧化物酶 POD 活性 紫外吸收法 測定過氧化氫酶 C T 活性 茚三酮顯色法 測定游離脯氨酸的含量 從黃瓜植株出現(xiàn)第 株病株開始 每天調(diào)查 所有植株發(fā)病情況 進(jìn)行病情指數(shù)統(tǒng)計(jì) 防治效 果參照張素平 的分級標(biāo)準(zhǔn) 病情指數(shù)參照宗 兆鋒等 6 的標(biāo)準(zhǔn) 級 無癥狀 級 真葉 子葉 黃化或萎蔫面積不超過總面積的 級 真 葉 子葉黃化或萎蔫面積超過總面積的 級 葉片萎蔫或枯死 僅生長點(diǎn)存活 級 全株嚴(yán) 重萎蔫 以致枯死 病情指數(shù) 病級株 數(shù) 代表級數(shù) 植株總數(shù) 最高代表級值 防治效果 對照病情指數(shù) 處理 病情指數(shù) 對照病情指數(shù) 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS 對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì) 通過單因 素方差分析和Dunc n法計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤 分析差異顯著性 使用O igin 軟 件繪制圖表 圖表中數(shù)據(jù)為平均值 標(biāo)準(zhǔn)誤 結(jié)果與分析 不同培養(yǎng)基質(zhì)和母藥助劑對木霉菌產(chǎn)孢量 的影響 由表 可知 在各種培養(yǎng)基質(zhì)和母藥助劑 中 種木霉的菌絲均能生長 但產(chǎn)孢量差異顯 著 表明不同的培養(yǎng)基質(zhì) 木霉菌母藥助劑對哈 茨木霉 和深綠木霉 菌絲生長的影響 不同 草炭 牛糞 蛭石質(zhì)量比為 的培養(yǎng)基 中 種木霉菌的產(chǎn)孢量最大 添加炭黑紫外保 護(hù)劑使 種木霉菌產(chǎn)孢量顯著高于其余各組 說 明炭黑能有效抵御紫外線對木霉的傷害 提高木 霉水分散粒劑的利用效率 磷酸鉀 羧甲基纖維 素分別是哈茨木霉 的最佳穩(wěn)定劑和黏結(jié) 劑 而深綠木霉 則在添加羧甲基纖維素 鈉 P P條件下最穩(wěn)定 可溶性淀粉作為崩解劑 時(shí) 種木霉菌的產(chǎn)孢量都顯著高于對照 說明 種崩解劑都與木霉菌有較好的相容性 凹凸棒 土為載體時(shí) 種木霉菌產(chǎn)孢水平均較低于對照 組 說明凹凸棒土對木霉菌生長存在抑制作用 硅藻土為載體時(shí) 哈茨木霉產(chǎn)孢量最大 顯著大 于其他處理 高嶺土為載體時(shí) 深綠木霉產(chǎn)孢量 最大 顯著大于其他處理 濕潤劑中木質(zhì)素磺酸 鈉對木霉菌有較好地保護(hù)作用 而十二烷基硫酸 鈉和十二烷基苯磺酸鈉的保護(hù)作用不明顯 對哈茨木霉 深綠木霉 水分散 粒劑的相關(guān)指標(biāo)和貯存穩(wěn)定性進(jìn)行篩選 最終確 定哈茨木霉 水分散粒劑中助劑的最佳配 方 質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為 炭黑 磷酸鉀 羧甲 基纖維素 可溶性淀粉 硅藻土 和木 質(zhì)素磺酸鈉 該配方水分散粒劑的孢子含量 為6 g 6 水分含量 濕潤時(shí)間 s 顆粒強(qiáng)度強(qiáng) 各項(xiàng)檢測結(jié)果均符合國家標(biāo) 準(zhǔn) 最終確定深綠木霉 水分散粒劑中助 劑的最佳配方 質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為 炭黑 羧甲 基纖維素鈉 聚乙烯基吡咯烷酮 P P 可溶性淀粉 高嶺土 和木質(zhì)素磺酸鈉 該配方水分散粒劑的孢子含量為 6 g 6 水分含量 濕潤時(shí)間 s 顆粒強(qiáng)度較弱 各項(xiàng)檢測結(jié)果均符合國家標(biāo)準(zhǔn) 木霉水分散粒劑對黃瓜抗氧化酶系統(tǒng)的影響 在受到病原菌侵害時(shí) 植物體內(nèi)會產(chǎn)生過量 的活性氧 對植物產(chǎn)生危害 抗氧化系統(tǒng)可以 減少活性氧積累和逆境條件下的氧化損傷 由 圖 得出 接種木霉水分散粒劑后 黃瓜葉片 SOD POD和C T活性較P處理有顯著提高 不 同木霉水分散粒劑對抗氧化酶活性的調(diào)節(jié)程度存 朱森林 等 木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果 表1 不同培養(yǎng)基質(zhì)和母藥助劑對 種木霉菌產(chǎn)孢量的影響 Table 1 ec s o di e en cu u e medium nd mo e medicine ddi ive on s o u ion yie d o o Trichoderma s s ins 處理 T e men g ou 哈茨木霉 產(chǎn)孢量 Trichoderma harzianum S o u ion 6 g 深綠木霉 產(chǎn)孢量 Trichoderma atroviride s o u ion g 培養(yǎng)基質(zhì) 草炭 牛糞 蛭石質(zhì)量比 Cu u e medium m ss io o e 6 b b co dung nd ve micu i e c c d d C d 66 66 d 紫外保護(hù)劑炭黑C bon b ck 66 6 6 U o ec ion gen 環(huán)糊精 cyc ode in 6 6 b 6 b 抗壞血酸 sco bic cid 666 bc d 羧甲基纖維素C bo yme y ce u ose 66 66 c c C c d 穩(wěn)定劑S bi ize 碳酸鈣C CO d d 磷酸鉀 PO b 羧甲基纖維素鈉C C N b 磷酸氫二鉀 PO c c C d 66 d 粘結(jié)劑Binde 淀粉S c 6 6 d b 羧甲基纖維素C bo yme y ce u ose d P P 6 6 c P b b C d c 崩解劑Disin eg n 可溶性淀粉So ub e s c 硫酸鈉N SO 666 b 666 bc 尿素U e bc b 硫酸銨 N SO c 66 c C 666 c bc 載體C ie 凹凸棒土 u gi e 666 c c 石英砂Qu z s nd 666 b 666 bc 高嶺土 o in b 666 硅藻土T i o i b C 666 c 6 b 濕潤劑We ing gen 木質(zhì)素磺酸鈉Sodium ignosu on e 十二烷基硫酸鈉Sodium dodecy su e 66 b 6 66 b 十二烷基苯磺酸鈉SDBS 666 c 66 66 c C 66 6 b c 同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表示差異顯著 P D m ked i ou e s me o e c se e e in e c co umn indic ed signi ic n di e ences P 在差異 處理 和 d T B處理的黃瓜葉片 SOD POD和C T活性均低于T B處理 由此可 見 接種木霉水分散粒劑可提高黃瓜葉片的抗氧 化酶活性 且其對黃瓜葉片抗氧化酶活性的影響 存在品種間差異 深綠木霉作用效果更佳 木霉水分散粒劑對黃瓜 D 和脯氨酸含 量的影響 由圖 可以看出 T T 處理的黃瓜葉片 D 含量均顯著低于P處理 差值最大可達(dá)P 處理的 和 T T 處理之間差異 不顯著 深綠木霉水分散粒劑或多菌靈和病原 菌同時(shí)施用有利于減緩黃瓜葉片 D 含量的累 積 B處理的葉片 D 含量最高 T B T B和 CB處理的 D 含量均顯著低于B處理 T B處 理的 D 含量最低 較B處理最大降幅分別達(dá) 66 T B處理與CB處理 無顯著差異 由此可以得出 接種木霉水分散粒 劑可有限緩解黃瓜葉片中 D 的積累 減少活性 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 第 卷 第6期 數(shù)據(jù)以鮮質(zhì)量計(jì) 柱上無相同小寫字母表示差異顯著 P T 接種哈茨木霉水分散粒劑 T 接種深綠木霉水分 散粒劑 T B 接種哈茨木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌 T B 接 種深綠木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌 B 接種尖孢鐮刀菌 CB 接種多菌靈和尖孢鐮刀菌 P 無菌水對照組 下同 D s de ec ed b sed on es eig D on e b s m ked i ou e s me o e c se e e indic ed signi ic n di e ences P T nocu ed i Trichoderma harzianum e dis e sing g nu e T nocu ed i Trichoderma atroviride e dis e sing g nu e T B nocu ed i Trichoderma harzianum e dis e sing g nu e nd Fusarium oxysporum T B nocu ed i Trichoderma atroviride e dis e sing g nu e nd Fusar ium oxysporum B nocu e i Fusarium oxysporum CB noc u ed i c bend zim nd Fusarium oxysporum P Con o g ou inocu ed i s e i e e T e s me s be o 圖1 木霉水分散粒劑對黃瓜抗氧化酶系統(tǒng)的影響 Fig 1 ec s o Trichoderma e dis e sing g nu e on n io id n enzyme sys em o Cucumis sativus 圖2 木霉水分散粒劑對黃瓜 D 和脯氨酸含量 的影響 Fig 2 ec s o Trichoderma e dis e sing g nu e on D nd o ine con en o Cucumis sativus 氧自由基生成量 減輕膜脂過氧化程度 脯氨酸是植物蛋白質(zhì)的組分之一 以游離狀 態(tài)廣泛存在于植物體中 是植物體內(nèi)的一種重要 抗逆境調(diào)節(jié)物 由圖 可見 較P處理而言 B處理脯氨酸含量顯著下降 在 d降幅 分別達(dá) 6 T B和T B處 理的葉片脯氨酸含量分別比B處理最大提高了 6 說明木霉水分散粒劑對尖孢 鐮刀菌有抑制作用 接種深綠木霉水分散粒劑 T B 比接種哈茨木霉水分散粒劑 T B 效果 更佳 木霉水分散粒劑對黃瓜葉綠素含量的影響 葉綠素含量可直接反映植物光合作用的情 況 由圖 可知 T 處理葉片葉綠素含量最 高 在試驗(yàn)后期 處理 d 顯著高于T T B 和T B處理 處理 d T B處理葉綠素含量顯 著高于T B和CB處理 處理不同時(shí)間 T B處 理葉綠素含量均顯著高于B處理 處理 d T B 朱森林 等 木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果 圖3 木霉水分散粒劑對黃瓜葉綠素含量的影響 Fig 3 ec s o Trichoderma e dis e sing g nu e on c o o y con en o Cucumis sativus 處理比B處理葉綠素含量高6 6 處理 d T B處理比P處理葉綠素含量高 可見 不同木霉水分散粒劑對染病幼苗葉綠素含量的 影響存在差異 但 種木霉水分散粒劑均可提高 黃瓜葉片的葉綠素含量 木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病病情指數(shù)和 防治效果的影響 由圖 可知 木霉水分散粒劑處理組 T B T B 和施加多菌靈組 CB 的病情指數(shù)分別為 和 6 6 顯著低于尖孢鐮刀菌處理 組 B 且施加深綠木霉水分散粒劑組的黃瓜發(fā) 病程度最低 從防治效果看 接種病害 d后 圖4 木霉水分散粒劑對黃瓜病情指數(shù)和防治效果 的影響 Fig 4 ec s o Trichoderma e dis e sing g nu e on dise se inde nd con o e ec o Cucumis sativus T B的防效顯著高于T B處理 與多菌靈處理組 CB 差異不顯著 而T B的防效也與多菌靈處 理 CB 組差異不顯著 可見 深綠木霉水分散 粒劑組的防效較哈茨木霉水分散粒劑好 討論 木霉菌作為一類環(huán)境友好型生防真菌 對多 種植物病原菌有拮抗作用 有研究表明 其 通過調(diào)節(jié)黃瓜體內(nèi)抗氧化酶活性 生物膜過氧化 程度和脯氨酸含量等 對植物體內(nèi)因逆境脅迫而 產(chǎn)生的大量氧自由基進(jìn)行清除 防止活性氧 ROS 誘導(dǎo)細(xì)胞損傷 本研究顯示 在受尖 孢鐮刀菌侵害初期 黃瓜體內(nèi)SOD POD和C T 活性上升 D 含量降低 中后期則呈相反趨勢 而木霉水分散粒劑處理組可以明顯提高SOD POD和C T活性 由此推測 種木霉水分散粒劑 可以率先激活SOD POD和C T活性 并有效緩 解 D 的積累 激活植物本身的防御系統(tǒng) 減輕 生物膜抗氧化程度 增強(qiáng)植物抵抗病原菌侵害的 能力 脯氨酸能保持植物原生質(zhì)體與環(huán)境的滲 透平衡 黃瓜脯氨酸含量在木霉水分散粒劑 灌根后顯著提高 并隨著處理時(shí)間的延長而緩慢 上升 由此可見 木霉水分散粒劑能提高黃瓜的 抗逆性 進(jìn)而減輕尖孢鐮刀菌對其的危害 本研 究中 木霉水分散粒劑明顯促進(jìn)了黃瓜葉片葉綠 素的合成 提高了植物的光合能力 這與姜傳英 等 揭示的棘孢木霉可有效提高植物葉綠素含 量的結(jié)論相一致 深綠木霉水分散粒劑的防效 超過傳統(tǒng)的化學(xué)藥劑 高達(dá) 表現(xiàn)出良好 的治病能力 辛鑫等 研究表明 綠色木霉 6 對香蕉枯萎病有顯著抑制作用 與本研究中木 霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病防效結(jié)果相似 綜 上所述 在木霉水分散粒劑作用下 黃瓜的抗氧 化酶活性 脯氨酸和葉綠素含量顯著提高 D 含量降低 有利于緩解黃瓜枯萎病對植株造成的 傷害 表明木霉水分散粒劑對該病有良好的防治 效用 木霉菌對植物病原菌的拮抗存在多種機(jī)制 分別為競爭 重寄生和抗生作用 競爭作用 表現(xiàn)為對生長生存所需條件的競爭 木霉菌生長 迅速 生命力較強(qiáng) 在本實(shí)驗(yàn)中可能較尖孢鐮刀 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 第 卷 第6期 菌更快占領(lǐng)空間 吸取養(yǎng)分 通過對多組木霉菌 基因組信息進(jìn)行分析得出 重寄生是木霉最初的 生存模式 6 可清晰觀察到從識別病原菌到寄 生的復(fù)雜過程 木霉菌對病原物最直接的生 防機(jī)制是重寄生作用 在這個(gè)過程中 木霉菌通 過產(chǎn)生大量真菌壁的降解酶來降解病原菌的細(xì) 胞壁 從而達(dá)到寄生和殺死病原菌的效果 與本 實(shí)驗(yàn)得出木霉水分散粒劑具有良好的防病成效 結(jié)果相一致 此外 土壤中的木霉菌對植物地上 部分發(fā)生的病害也有一定的防治效果 即木霉菌 的誘導(dǎo)抗性作用 Bigi im n 等 首次證明了 木霉菌具有誘導(dǎo)植物抗性的效果 木霉菌在植 物根部定殖 刺激植物產(chǎn)生胞壁沉積物 可不同 程度上阻止病原菌入侵 并增加植物體內(nèi)與 防御有關(guān)酶的合成與積累 使植物產(chǎn)生防御反 應(yīng) 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 接種木霉水分散粒劑 后 黃瓜抗氧化酶系活力顯著提升 因此 推測 木霉水分散粒劑能增強(qiáng)黃瓜抗性的主要原因是 競爭 重寄生和誘導(dǎo)抗性等多種機(jī)制共作的 結(jié)果 環(huán)境因素對生物制劑的穩(wěn)定性影響較大 且 藥效也隨之改變 其中 以孢子制劑為甚 選 擇與木霉菌有較好相容性的各類母藥助劑加入 木霉水分散粒劑中 可有效減小外界環(huán)境造成的 藥效不穩(wěn)定性 本研究的 種紫外保護(hù)劑中 炭黑作為紫外保護(hù)劑時(shí) 種木霉菌產(chǎn)孢量最高 磷酸鉀作為穩(wěn)定劑時(shí)對哈茨木霉孢子的相容 性最好 深綠木霉的最佳穩(wěn)定劑為 羧甲基纖 維素鈉 測定備選顆粒劑的粒度 堆密度 松密 度 從中篩選出與木霉菌相容性較好且成粒 率高者作為黏結(jié)劑 在供試的 種黏結(jié)劑中 羧甲基纖維素和聚乙烯基吡咯烷酮 P P 分 別對哈茨木霉 深綠木霉孢子萌發(fā)影響較小 可 考慮利用兩者作為哈茨木霉 深綠木霉水分散粒 劑的黏結(jié)劑 崩解劑以崩解時(shí)間小于 s為合 格 可溶性淀粉對 種木霉菌孢子活性的影 響低于其他處理 其產(chǎn)孢量分別較對照組高 所以 可溶性淀粉可作為木 霉水分散粒劑的崩解劑 哈茨木霉的最佳載體 為 硅藻土 而深綠木霉的最佳載體為 高 嶺土 本試驗(yàn)所選的 種濕潤劑對木霉菌絲的 生長均沒有影響 最佳濕潤劑為 木質(zhì)素磺 酸鈉 合理采用物理 化學(xué) 生物手段進(jìn)行土傳病 害的防治 對農(nóng)作物的安全生產(chǎn)至關(guān)重要 本研 究探討了木霉水分散粒劑對黃瓜生理特性的影 響 闡明了其對于黃瓜枯萎病的防治效果 對黃 瓜的安全生產(chǎn)具有一定意義 但木霉水分散粒 劑對黃瓜生長的影響是多方面的 下一步需深入 探究木霉水分散粒劑對黃瓜生長發(fā)育各方面的 影響 以提高其生產(chǎn)效益和經(jīng)濟(jì)價(jià)值 促進(jìn)黃瓜 的開發(fā)利用和推廣種植 為生防菌的施用環(huán)境與 劑量探索提供理論依據(jù) 木霉水分散粒劑可與 化學(xué)手段配合解決植物病蟲害問題 逐漸減少農(nóng) 藥用量 為營造綠色生態(tài)環(huán)境貢獻(xiàn)力量 木霉水 分散粒劑對黃瓜枯萎病具有拮抗作用 且深綠木 霉 水分散粒劑較哈茨木霉 水分散粒 劑防治效用更好 木霉水分散粒劑能通過重寄 生和誘導(dǎo)抗性作用等過程增強(qiáng)植株的抗氧化酶 活性 促進(jìn)其光合作用和調(diào)節(jié)其 D 及脯氨酸 含量 進(jìn)而減緩尖孢鐮刀菌對黃瓜生長的抑制 因此 在黃瓜規(guī)?；a(chǎn)中 可選擇適宜劑量的 深綠木霉水分散粒劑進(jìn)行處理 以期達(dá)到黃瓜的 最佳栽培效果 參考文獻(xiàn) References 陳立華 哈茨木霉及其微生物有機(jī)肥對黃瓜土傳枯萎病 的生物防治及其機(jī)理 D 南京 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) C N Bio ogic con o o us ium i o cucumbe i Trichoderma harzianum bioo g nic e i ize nd i s mec nism D N n ing N n ing g icu u Unive si y in C inese i ng is bs c 王漢榮 茹水江 王連平 等 黃瓜嫁接防治枯萎病和疫 病技術(shù)的研究 J 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 6 6 W NG R RU S J W NG P e S udy on e con o o us ium i nd y o o b ig in cucumbe by g ing J Acta Agriculturae Zhejiangensis 6 6 in C inese i ng is bs c 楊侃侃 劉曉虹 陳宸 等 黃瓜枯萎病研究進(jìn)展 J 湖 南農(nóng)業(yè)科學(xué) 6 Y NG U X C N C e Rese c og ess o cucumbe Fus ium i J Hunan Agricultural Sciences 6 in C inese i ng is bs c 劉士旺 生防綠色木霉工程菌的構(gòu)建及其誘導(dǎo)植物抗病 性研究 D 杭州 浙江大學(xué) U S W Cons uc ion o bio ogic con o s ins o Tri 朱森林 等 木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果 choderma viride nd s udy o ei bi i y o induce n dis e se esis nce D ngz ou Z e i ng Unive si y in C inese i ng is bs c R X C F P NG G e So ubi is ion o os e nd mic onu ien s by Trichoderma harzianum nd i s e ion s i i e omo ion o om o n g o J PLoS One 6 e 6 X ONG W GUO S JOUSS T e Bio e i ize ic ion induces soi su essiveness g ins us ium i dise se by es ing e soi mic obiome J Soil Biology and Bio chemistry SU D C D N J F S R UJOD P C S e Trichoderma asperelloides n gonism o nine Sclerotinia sclero tiorum s ins nd bio ogic con o o i e mo d dise se in soybe n n s J Biocontrol Science and Technology 6 GUPT J UR J BROT N Y Trichoderma as perelloides su esses ni ic o ide gene ion e ici ed by Fusari um oxysporum in Arabidopsis oo s J Molecular Plant Mi crobe Interactions OT ST N GR W T US W R e In vitro n gonism o Trichoderma s g ins Sclerotium rolfsii nd Rhizoctonia solani nd ei es onse o ds g o o cu cumbe bo e gou d nd bi e gou d J European Journal of Plant Pathology P NG G C F R X e Trichoderma en ic ed o g nic e i ize c n mi ig e mic obiome degene ion o mono c o ed soi o m in in be e n g o J Plant and Soil 6 徐文 黃媛媛 黃亞麗 等 木霉 植物互作機(jī)制的研究 進(jìn)展 J 中國生物防治學(xué)報(bào) XU W U NG Y Y U NG Y e dv nces on mec nism o Trichoderma n in e c ion J Chinese Journal of Biological Control in C inese i ng is bs c 牛鑫斌 徐秉良 劉佳 等 長枝木霉T6水分散粒劑對 種植物病害的生防效果 J 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) N U X B XU B U J e Bio ogic con o e iciency o T longibrachiatum T6 e dis e sib e g nu es g ins ee kinds o n dise se J Journal of Gansu Agricultur al University in C inese i ng is bs c 黃劍 吳文君 利用 XC 快速進(jìn)行毒力測定中的致死 中量計(jì)算和卡方檢驗(yàn) J 昆蟲知識 6 U NG J WU W J C cu e e medi n e dose nd C i squ e es i XC in o ico ogic es J Ento mological Knowledge 6 in C inese i ng is bs c 王燕云 趙龍杰 郝春莉 等 生物有機(jī)肥對不同連作年 限設(shè)施黃瓜土壤微生物數(shù)量和酶活性的影響 J 浙江 農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 6 6 W NG Y Y Z O J O C e ec s o bio o g nic e i ize on soi mic obi o u ion nd enzymes c iv i ies unde di e en con inuous c o ing ye s o o ec ed cucumbe J Acta Agriculturae Zhejiangensis 6 6 in C inese i ng is bs c 谷祖敏 畢卉 張兵 等 不同木霉菌株對黃瓜枯萎病菌 的拮抗作用 J 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 6 GU Z B Z NG B e n ibi ion c ion o di e en Trichoderma strains on Fusarium oxysporum s cu cumerinum J Acta Agriculturae Boreali Occidentalis Sini ca 6 in C inese i ng is b s c 6 高長敏 馬光恕 廉華 等 木霉菌對黃瓜幼苗生長和膜 脂過氧化指標(biāo)的影響及對枯萎病的防治效果 J 中國 生物防治學(xué)報(bào) 6 G O C G S N e ec o Trichoderma on e g o o cucumbe seed ings memb ne i id inde es nd con o e ec g ins Fus ium i J Chinese Journal of Biological Control 6 in C inese i ng is bs c B R T R SR ec o Trichoderma har zianum in combin ion i ungicides in con o ing g y mou d dise se Botrytis cinerea o s be y J American Journal of Plant Sciences 6 66 RBY F R NOS S C e W e dis e sib e g nu e o mu ions con ining ne de o ming gen J Journal of ASTM International URC ORTON P cc im ion o o osyn esis o i di nce nd s ec qu i y in B i is n s ecies c o o y con en o osyn e ic c ci y nd bi e e ence J Plant Cell and Environment S C UT N ec s o ig em e u e on m ondi de yde con en su e o ide oduc ion nd g o c nges in e seed ings Triticum aestivum J Ekologija 6 6 N NT R N S P D R J N T Y R N G S e Nin yd in sodium mo ybd e c omogenic n y i c obe o e ss y o mino cids nd o eins J Spec trochimica Acta Part A Molecular and Biomolecular Spectros copy 張志良 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 版 北京 高等教 育出版社 6 趙煬 李永生 高秀峰 基于愈創(chuàng)木酚熒光減量準(zhǔn)確測 定過氧化物酶活性的新方法 J 分析化學(xué) 6 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 第 卷 第6期 6 Z O Y Y S G O X F ne me od o ccu e de e min ion o e o id se c ivi y b sed on uo escence de c e se o gu i co J Chinese Journal of Analytical Chemis try 6 in C inese i ng is bs c T N W U J D T e e ions in o osyn esis nd n io id n enzyme c ivi y in in e e sub ec ed o os n esis e ogging J Photosyntheti