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2020 46 5 42 46 收稿日期 修訂日期 基金項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金 湖南省科技計(jì)劃 國(guó)家大宗蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 湖 南省自然科學(xué)基金 通信作者 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱發(fā)生對(duì)番茄褪綠病毒 流行的影響 王帥鑫 史曉斌 張戰(zhàn)泓 鄭立敏 劉 勇 張德詠 譚新球 周序國(guó) 湖南大學(xué)研究生院隆平分院 長(zhǎng)沙 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù) 研究所 長(zhǎng)沙 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所 長(zhǎng)沙 摘要 番茄褪綠病毒 對(duì)我國(guó)番茄種植業(yè)破壞極大 而粉虱類(lèi)昆蟲(chóng)是其主要傳播介 體 本研究調(diào)查了我國(guó)內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市和貴州省貴陽(yáng)市的番茄褪綠病毒病發(fā)生情況 發(fā)現(xiàn)赤峰市的發(fā)病率為 貴陽(yáng)市的發(fā)病率為 兩個(gè)地區(qū)均存在 型煙粉虱和溫室白粉虱 赤峰市的 型煙粉虱和溫室白粉 虱分別占 和 貴陽(yáng)市的 型煙粉虱和溫室白粉虱分別占 和 對(duì)兩個(gè)地區(qū)的兩種粉虱 種群在室內(nèi)進(jìn)行傳毒特性研究 結(jié)果發(fā)現(xiàn) 經(jīng)過(guò) 獲毒后 型煙粉虱和溫室白粉虱的獲毒量沒(méi)有明顯差異 但無(wú) 論 頭或 頭粉虱 型煙粉虱的傳毒量都高于溫室白粉虱 結(jié)果說(shuō)明 近年來(lái)隨著 型煙粉虱發(fā)生的日益嚴(yán) 重 番茄褪綠病毒通過(guò) 型煙粉虱的傳播值得人們重視和進(jìn)一步研究 關(guān)鍵詞 番茄褪綠病毒 型煙粉虱 溫室白粉虱 傳毒特性 中圖分類(lèi)號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 卷第 期 王帥鑫等 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱發(fā)生對(duì)番茄褪綠病毒流行的影響 粉虱屬于昆蟲(chóng)綱 半翅目 粉虱亞目 是世界上 最重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)之一 在世界各地均有分布 粉 虱包括很多種 生產(chǎn)上為害最嚴(yán)重的是煙粉虱 和溫室白粉虱 煙粉虱的取食和擴(kuò)散行為對(duì)世界各國(guó)的作物 種植 生產(chǎn)等造成了嚴(yán)重的不利影響 由此帶來(lái)了巨 大的經(jīng)濟(jì)損失和各種資源的浪費(fèi) 全球的煙粉虱 種類(lèi)已知至少有 個(gè)生物型 目前全球?yàn)楹?yán) 重的煙粉虱主要是 型 隱種 和 型 隱種 型煙粉虱和 型煙粉虱先后侵 入我國(guó) 并且?guī)?lái)了嚴(yán)重的損失和危害 番茄褪綠病毒 屬于長(zhǎng)線形病毒科 毛形病毒屬 是由煙粉虱和溫室白粉虱傳播的雙分體 單鏈 病毒 除了感染番茄外 還可以 侵染辣椒 煙草 茄子 等植物 最早在 美國(guó)佛羅里達(dá)州被發(fā)現(xiàn)并報(bào)道 隨后在南美洲 非洲 歐洲 相繼被報(bào)道 年 在中國(guó)臺(tái) 灣 首次發(fā)現(xiàn) 隨后在北京 河北 湖 南 云南 山東 等地逐漸蔓延傳播 本研究調(diào)查了我國(guó)西南部的貴州省貴陽(yáng)市花溪 區(qū)和東北部的內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市兩個(gè)地區(qū)番茄褪 綠病毒病的發(fā)生情況 調(diào)查過(guò)程中發(fā)現(xiàn) 這兩個(gè)地區(qū) 均存在煙粉虱和溫室白粉虱種群 因此 我們調(diào)查 了兩種粉虱在發(fā)病植株上的分布比例 并根據(jù)調(diào)查 結(jié)果 采集了煙粉虱和溫室白粉虱并在室內(nèi)研究了 二者對(duì)番茄褪綠病毒的獲毒和傳毒情況 以期為我 國(guó)南北方的番茄褪綠病毒及其介體昆蟲(chóng)防治提供 參考 材料與方法 樣品采集 年 月 在內(nèi)蒙古赤峰市和貴州省貴陽(yáng)市 花溪區(qū)大棚內(nèi) 發(fā)現(xiàn)有疑似感染番茄褪綠病毒的番 茄植株 分別在兩地的大棚內(nèi)隨機(jī)采集番茄葉片 份 帶回實(shí)驗(yàn)室通過(guò) 方法檢測(cè) 同時(shí)在大 棚內(nèi)發(fā)現(xiàn)有煙粉虱和溫室白粉虱 調(diào)查葉片上兩種 粉虱數(shù)量并記錄 葉片樣品采用以 基因設(shè)計(jì)的特異性引物 表 進(jìn)行檢測(cè) 煙粉虱生 物型鑒定參考王雪忠等 的方法進(jìn)行 粉虱種群的建立 從貴陽(yáng)市和赤峰市帶回?zé)煼凼蜏厥野追凼?分別飼喂于健康無(wú)毒棉花植株上 棉花是粉虱的寄 主植物 但不會(huì)感染番茄褪綠病毒 且番茄褪綠病毒 在粉虱體內(nèi)為半持久性傳播 經(jīng)過(guò)一段時(shí)間病毒會(huì) 從粉虱體內(nèi)消失 此時(shí)鑒定粉虱無(wú)毒后進(jìn)行后續(xù)試 驗(yàn) 同時(shí)在顯微鏡下將煙粉虱的雌性和雄性分開(kāi) 每一雌一雄為一組 在養(yǎng)蟲(chóng)籠內(nèi)分開(kāi)飼養(yǎng) 每一代進(jìn) 行生物型鑒定 只選取鑒定后種群全部為 型煙粉 虱的組合進(jìn)行下一代飼養(yǎng) 飼養(yǎng) 代后的成蟲(chóng)經(jīng)生 物型鑒定后 用于本試驗(yàn) 番茄總 的提取 番茄總 采用 法提取 將液氮速凍過(guò) 的番茄葉片用磨樣機(jī)充分研磨后加入 振 蕩 將勻漿室溫放置 加入 氯仿 渦旋 振蕩 室溫放置 下 離心 移取上清液 至 的 離心管中 加入等體積異丙醇 輕輕顛倒混勻 靜置 下 離心 棄上清液 用現(xiàn)配無(wú)核酸酶的 乙醇洗滌沉淀 離心 重復(fù) 次 將離心管內(nèi)剩余液 體吸出 加入 溶解 經(jīng)檢測(cè) 合格后立即反轉(zhuǎn)錄合成 的合成 的合成使用 生物公司 按照 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行 在 管中分別加入 加熱 后在冰上靜置 混 合液中加入 吹打混勻 后 混合液中加入 程序如下 保存?zhèn)溆?擴(kuò)增和電泳檢測(cè) 體系中使用的引物為 基因特 異性引物 和 表 使用 生物公司 進(jìn)行 反應(yīng) 體系如下 模板 共 以質(zhì)粒作為陽(yáng)性 對(duì)照 體系內(nèi)其余成分不變 程序?yàn)?個(gè)循環(huán) 延伸 將 產(chǎn)物通過(guò) 瓊脂糖凝 膠電泳進(jìn)行檢測(cè) 剩余產(chǎn)物送至北京擎科新業(yè)生物 技術(shù)有限公司測(cè)序 測(cè)序結(jié)果在 利用 進(jìn)行比對(duì) 每個(gè)地區(qū)的樣品進(jìn)行 個(gè)重復(fù) 粉虱獲取 的特性 取剛羽化的經(jīng)飼養(yǎng)和鑒定無(wú)毒的 型煙粉虱 和溫室白粉虱 用微蟲(chóng)籠分別將其夾在感染 的番茄上 每個(gè)處理 株番茄 每株番茄放 個(gè)微 蟲(chóng)籠 每個(gè)微蟲(chóng)籠內(nèi)接 頭粉虱 分別在兩個(gè)時(shí)間 點(diǎn) 和 從飼喂 型煙粉虱和溫室白粉虱的 株帶毒番茄中隨機(jī)選取 株 每株番茄上取 頭粉虱 保存于 冰箱 最后提取兩種粉虱 熒光定量 法分別測(cè)定不同時(shí)間內(nèi)溫室 白粉虱 型煙粉虱的獲毒量 重復(fù) 次 所獲得 的數(shù)據(jù)采用 分析 粉虱傳播 的特性 選取室內(nèi)飼養(yǎng)在棉花上的無(wú)毒 型煙粉虱和 溫室白粉虱 設(shè)置 頭 頭兩個(gè)處理 在獲毒 后 分別將 頭和 頭獲毒后 型煙粉虱和溫室白 粉虱轉(zhuǎn)移到 片真葉的健康小番茄苗上 后 將 煙粉虱移走 并分別將 型煙粉虱和溫室白粉虱接 毒后的植株放入不同的干凈育苗籠中進(jìn)行培養(yǎng) 隔 絕粉虱 分別在 后用熒光定量 法比較番 茄葉片帶毒量 明確煙粉虱傳毒與煙粉虱數(shù)量的關(guān) 系 重復(fù) 次 所獲得的數(shù)據(jù)采用 分析 表 引物信息 引物 序列 作用 溫室白粉虱內(nèi)參基因 煙粉虱內(nèi)參基因 番茄內(nèi)參基因 結(jié)果與分析 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū) 發(fā)生情況 將采集到的番茄葉片提取 之后進(jìn)行 檢測(cè) 經(jīng)電泳檢測(cè)后 將有條帶的 產(chǎn)物測(cè) 序 并在 比對(duì)之后 發(fā)現(xiàn)與 的同 源性最高 相似度達(dá) 確定番茄葉片帶毒 圖 圖 結(jié)合田間病毒病發(fā)生情況 證實(shí)了內(nèi)蒙古 的發(fā)生率高于貴州地區(qū) 表 圖 貴陽(yáng)番茄樣品的 檢測(cè)結(jié)果 圖 赤峰番茄樣品的 檢測(cè)結(jié)果 表 在貴陽(yáng)和赤峰的番茄葉片中的發(fā)生率 采樣地區(qū) 檢測(cè)數(shù)量 個(gè) 發(fā)病數(shù)量 個(gè) 發(fā)病率 貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū) 內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市 卷第 期 王帥鑫等 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱發(fā)生對(duì)番茄褪綠病毒流行的影響 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)粉虱數(shù)量分布情況 通過(guò)調(diào)查內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)大棚內(nèi)的粉虱種類(lèi) 和數(shù)量發(fā)現(xiàn) 表 內(nèi)蒙古和貴州地區(qū)都是 型煙 粉虱和溫室白粉虱復(fù)合侵染 其中內(nèi)蒙古赤峰市的 型煙粉虱比例為 溫室白粉虱比例為 貴州省貴陽(yáng)市 型煙粉虱比例為 溫室白粉虱比例為 表 內(nèi)蒙古赤峰和貴州貴陽(yáng)地區(qū) 種粉虱數(shù)量比例 采樣地區(qū) 粉虱總數(shù) 頭 型煙粉 虱數(shù)量 頭 型煙粉虱 比例 溫室白粉 虱數(shù)量 頭 溫室白粉 虱比例 貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū) 內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市 兩種粉虱獲取 的對(duì)比 在感病番茄上取食 后 型煙粉虱和溫室 白粉虱的獲毒量并未表現(xiàn)出顯著差異 但從數(shù)值上 看 型煙粉虱的獲毒量高于溫室白粉虱的獲毒量 圖 兩種粉虱傳播 的對(duì)比 分別用 頭 頭 型煙粉虱和溫室白粉虱進(jìn) 行傳毒研究發(fā)現(xiàn) 不同數(shù)量 型煙粉虱和溫室白粉 虱的傳毒能力不同 總體來(lái)說(shuō) 頭 型煙粉虱和 溫室白粉虱的傳毒量均高于 頭的傳毒量 單獨(dú)對(duì) 比 頭或 頭粉虱的傳毒情況 發(fā)現(xiàn) 型煙粉虱傳 播到植株上的病毒量較溫室白粉虱更高 差異顯著 圖 圖 兩種粉虱在感染 的番茄上獲毒量對(duì)比 圖 不同數(shù)量粉虱的 傳毒量對(duì)比 討論 本研究調(diào)查了內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市和貴州省貴 陽(yáng)市番茄褪綠病毒病的發(fā)生情況 并以采集到的番 茄樣品為試驗(yàn)材料 通過(guò) 的方法 分別檢 測(cè)了兩個(gè)地區(qū)番茄植株感染番茄褪綠病毒的情況 發(fā)現(xiàn)赤峰市的番茄感染率比貴陽(yáng)市花溪區(qū)的高 同 時(shí)調(diào)查了大棚里番茄植株上 型煙粉虱和溫室白 粉虱的數(shù)量 以及通過(guò)在室內(nèi)利用 技術(shù)比較 溫室白粉虱和 型煙粉虱的獲毒和傳毒情況 證實(shí) 了番茄褪綠病毒的傳播主要是以 型煙粉虱為主 型煙粉虱和溫室白粉虱在全世界范圍內(nèi)都是 對(duì)作物產(chǎn)量有嚴(yán)重影響的昆蟲(chóng) 同時(shí)也都是很重要 的病毒載體 本研究通過(guò)對(duì) 型煙粉虱和溫室 白粉虱傳播番茄褪綠病毒特性的研究 發(fā)現(xiàn)了 型 煙粉虱較強(qiáng)的獲毒和傳毒能力 這與之前的研究結(jié) 果一致 本研究還比較了 頭和 頭 型煙粉 虱和溫室白粉虱傳毒效率 發(fā)現(xiàn) 頭粉虱的傳毒量 高于 頭粉虱 由此可以推測(cè) 隨時(shí)間的積累 通過(guò) 粉虱傳毒的番茄發(fā)病情況將加重 這說(shuō)明田間煙粉 虱數(shù)量較多的時(shí)期 的發(fā)病率也將提高 需要 提前防治煙粉虱 從而減輕病毒病的發(fā)生 此 外 本研究證實(shí)了在我國(guó)溫室白粉虱也是番茄褪綠 病毒的重要傳播介體 值得引起人們的重視 在 田間防治的時(shí)候 尤其是有白粉虱發(fā)生的地區(qū) 不能 忽視對(duì)白粉虱的防治 目前 型煙粉虱和溫室白粉虱通過(guò)傳播病毒 給蔬菜產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的損失 番茄褪綠病毒 是近年來(lái)在我國(guó)發(fā)生日益嚴(yán)重的病害 已在很多地 區(qū)暴發(fā)成災(zāi) 造成嚴(yán)重?fù)p失 本研究可為研究番茄 褪綠病毒病的發(fā)生機(jī)制及有效控制病害的發(fā)生提供 理論依據(jù) 參考文獻(xiàn) 周瑩 黃金寶 喬廣行 等 北京地區(qū)茄子感染番茄褪綠病毒 的分子鑒定 植物保護(hù)學(xué)報(bào) 孫國(guó)珍 高利利 陸文利 等 河北省設(shè)施番茄褪綠病毒分子 檢測(cè)和鑒定研究 北方園藝 王雪忠 張戰(zhàn)泓 鄭立敏 等 番茄褪綠病毒在湖南省首次發(fā) 生 中國(guó)蔬菜 劉微 史曉斌 唐鑫 等 云南番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病 毒復(fù)合侵染的分子鑒定 園藝學(xué)報(bào) 趙黎明 李剛 劉永杰 等 侵染番茄的番茄褪綠病毒山東泰安 分離物的分子鑒定和序列分析 植物保護(hù) 下轉(zhuǎn) 頁(yè) 嚴(yán)儀寬 安打 茚蟲(chóng)威 在蔬菜害蟲(chóng)上的防治應(yīng)用 新農(nóng)藥 吳霞 擬除蟲(chóng)菊酯 氟蟲(chóng)腈和茚蟲(chóng)威作用機(jī)制的最新進(jìn)展 世界農(nóng)藥 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì) 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè) 農(nóng)村部 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理局 食品中農(nóng)藥最大殘留限量 北京 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所 中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)農(nóng)藥綜合查詢系統(tǒng) 食品伙伴網(wǎng) 食品數(shù)據(jù)庫(kù) 日本肯定列表查詢 廖丹 茚蟲(chóng)威在水稻中的殘留及其光降解研究 長(zhǎng)沙 湖 南師范大學(xué) 李暢方 何強(qiáng) 徐偉松 等 茚蟲(chóng)威在甘藍(lán)和土壤中的殘留量 及消解動(dòng)態(tài)研究 農(nóng)藥科學(xué)與管理 楊淑娟 郭建輝 蔡恩興 等 茚蟲(chóng)威在豇豆中殘留動(dòng)態(tài)及安全 使用技術(shù)研究 亞熱帶植物科學(xué) 趙學(xué)平 袁玉偉 胡秀卿 等 茚蟲(chóng)威和毒死蜱在小白菜中的殘 留及其膳食暴露評(píng)估 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 董豐收 鄭永權(quán) 沙憲英 等 茚蟲(chóng)威 懸浮劑在棉花和土 壤中的殘留動(dòng)態(tài)研究 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào) 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所 農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 北京 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種植業(yè)管理司 農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 吳永寧 李筱薇 第四次中國(guó)總膳食研究 北京 化學(xué)工 業(yè)出版社 劉清浩 劉新濤 倪云霞 等 吡蟲(chóng)啉在金銀花及土壤中的殘留 動(dòng)態(tài)研究 植物保護(hù) 王玉潔 薛健 金紅宇 等 金銀花中氟啶蟲(chóng)胺腈的殘留規(guī)律及 膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 中成藥 責(zé)任編輯 田 喆 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 上接 頁(yè) 劉萬(wàn)才 邵振潤(rùn) 姜瑞中 小麥白粉病測(cè)報(bào)與防治技術(shù)研究總 結(jié)報(bào)告 劉萬(wàn)才 邵振潤(rùn) 姜瑞中 小麥白粉病測(cè)報(bào)與防治 技術(shù)研究 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 周益林 盛寶欽 肖悅巖 小麥白粉病預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)的研究 趙美琦 麥田植保系統(tǒng)工程的研究 北京 北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版 社 邵振潤(rùn) 劉萬(wàn)才 姜瑞中 等 豫北麥區(qū)小麥白粉病中期測(cè)報(bào) 技術(shù)研究 植物保護(hù) 肖悅巖 預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)方法的研究 植保技術(shù)與推 廣 刁春友 沈龍?jiān)?江蘇省小麥白粉病預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)技術(shù)研究 劉萬(wàn)才 邵振潤(rùn) 姜瑞中 小麥白粉病測(cè)報(bào)與防治技術(shù)研究 北 京 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 沈麗 劉牛 廖華明 等 四川省小麥白粉病中期預(yù)測(cè)模型初 探 劉萬(wàn)才 邵振潤(rùn) 姜瑞中 小麥白粉病測(cè)報(bào)與防治技術(shù) 研究 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 李金鎖 南陽(yáng)盆地小麥白粉病中期測(cè)報(bào)技術(shù)研究 劉萬(wàn)才 邵 振潤(rùn) 姜瑞中 小麥白粉病測(cè)報(bào)與防治技術(shù)研究 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè) 出版社 李彤霄 河南省小麥白粉病綜合發(fā)生等級(jí)預(yù)測(cè)技術(shù)研究 河 南農(nóng)業(yè)科學(xué) 楊萬(wàn)海 董禮濤 王光寶 等 山東省小麥白粉病中長(zhǎng)期預(yù)報(bào) 技術(shù)研究 劉萬(wàn)才 邵振潤(rùn) 姜瑞中 小麥白粉病測(cè)報(bào)與防 治技術(shù)研究 北京 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 責(zé)任編輯 田 喆 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 上接 頁(yè) 李嬌嬌 張秀霞 周仙紅 等 日光溫室番茄褪綠病毒病的發(fā) 生規(guī)律及其與 型煙粉虱種群動(dòng)態(tài)關(guān)系 植物保護(hù)學(xué)報(bào) 張友軍 吳青君 王少麗 等 我國(guó)蔬菜重要害蟲(chóng)研究現(xiàn)狀與 展望 植物保護(hù) 責(zé)任編輯 田 喆